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色谱柱被污染有残留的判断

液相色谱(LC)

  • 今天看到一个网友的求助:

    部分内容如下:

    求助:液相走空白在目标物处出峰的问题,具体如下:
    目前测有关物质,样品浓度0.5mg/ml,进样量20ul,走完样品后,空白进样(空白走梯度)在目标物处就会出峰,峰面积约为20,连续走5针该峰大小不会变化。
    可能的情况:
    1,样品污染柱子,少量残留。尝试用心的柱子来试,仍然存在这样的问题。
    2,梯度洗脱而出。冲洗一夜后的柱子第二天走空白仍会有此情况
    3,检测器污染...这个还没有尝试
    或许还有其他情况,本人能想出的就这些了...
    想请高手们分析下,在此谢过


    最终解决:

    谢谢虫友们的分析:经过了昨天的实验已证明:是柱子污染 ,只要是走过样品就会在柱子中残留。具体方法如下:
    1.接两通,走空白(空针),无此残留峰,推断不是检测器污染;
    2,新柱子没走样前进溶剂,未出现残留峰。判断不是进样针或者阀污染;
    3,新柱子进样后,走空白,有残留峰存在。
    原因:选择的流动相未能目标物完全洗脱..准备换流动相试下



    如果根据残留的保留时间与原标准品重合且稳定、出峰面积每次都一样的情况来判断,个人觉得在进样器或者洗针液方面的可能性比较大,但是该网友最终判断为色谱柱有残留。

    那么,色谱柱被污染的现象有哪些呢?主要想不明白的是,色谱柱被污染,保留时间居然稳定,出峰面积也一样,这是什么原因呢?

    希望大家讨论下,您是否也遇到过此类问题呢?

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  • nixiaolong

    第1楼2013/07/24

    色谱柱污染一般主要在柱头部分,液相进样 是样品一次保留在柱头,然后通过流动相进行洗脱分离,有些物质在柱子里保留比较强,而你流动相不能全部洗脱就可能会出现上述现象。

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  • remioromen

    第2楼2013/07/24

    空白溶剂和流动相不同吧,在做方法时使用流动相来溶解可以避免以后的很多问题。

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  • wh2008

    第3楼2013/07/25

    如果说不能全部洗脱出来的话,那我认为应该能被不断的被冲洗下来,然后造成基线噪音高的情况吧。

    没进一次样就能被洗脱下来一部分,这种情况搞不明白?难道能识别到重新进样了?

    如果是梯度洗脱,还好理解点,但是保留时间不应该保持不变吧

    nixiaolong(nixiaolong) 发表:色谱柱污染一般主要在柱头部分,液相进样 是样品一次保留在柱头,然后通过流动相进行洗脱分离,有些物质在柱子里保留比较强,而你流动相不能全部洗脱就可能会出现上述现象。

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  • wh2008

    第4楼2013/07/25

    你是说空白溶解将目标物洗脱下来了,所以导致每进样一次,就被洗脱一次,然后保留时间也一致?

    remioromen(remioromen) 发表:空白溶剂和流动相不同把,在做方法时使用流动相来溶解可以避免以后的很多问题。

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  • nixiaolong

    第5楼2013/07/25

    你的空白是走空针 还是进试剂空白?

    wh2008(wh2008) 发表:如果说不能全部洗脱出来的话,那我认为应该能被不断的被冲洗下来,然后造成基线噪音高的情况吧。

    没进一次样就能被洗脱下来一部分,这种情况搞不明白?难道能识别到重新进样了?

    如果是梯度洗脱,还好理解点,但是保留时间不应该保持不变吧

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  • yzm

    第6楼2013/07/25

    个人刚开始感觉应该是空白样品在配制过程中带入目标物质,有可能是仪器不干净或其他等等的小问题。因为其连续进5针空白样,相当于连续洗脱了柱子5次,不可能峰面积不变化的吧,应该会慢慢变小啊,基于这点,个人也觉得不应该是样品残留。但是网友的解决办法中说到新柱子没走样前进溶剂(就是不知道他这里指的溶剂是空白样吗?如果指的是空白样,那我的设想空白样受污染的想法就不成立),未有残留峰。既然网友认为是流动相未能完全洗脱目标物,那为什么他不用改变下流动相的比例或组成的方法来进一步验证,而单单凭那3点就下结论呢。这个问题确实有待讨论,具体情况只有网友本人操作才知道,因为每个人操作过程不同,稍微有点不正确都会影响结果,液相就是那么麻烦。

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  • 武灵

    第7楼2013/07/25

    确实没法理解,如果是待测组分残留于柱子中,那连续进样5针时,肯定会逐渐洗脱掉一些的,即峰面积会减小。6楼分析的空白试剂受污染还是可能的。

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  • wh2008

    第8楼2013/07/25

    确实很多时候,问题原因的查找需要做很多的工作。甚至有时候最终解决了问题,却不一定能确定是哪里出现的问题。

    yzm(v2648824) 发表:个人刚开始感觉应该是空白样品在配制过程中带入目标物质,有可能是仪器不干净或其他等等的小问题。因为其连续进5针空白样,相当于连续洗脱了柱子5次,不可能峰面积不变化的吧,应该会慢慢变小啊,基于这点,个人也觉得不应该是样品残留。但是网友的解决办法中说到新柱子没走样前进溶剂(就是不知道他这里指的溶剂是空白样吗?如果指的是空白样,那我的设想空白样受污染的想法就不成立),未有残留峰。既然网友认为是流动相未能完全洗脱目标物,那为什么他不用改变下流动相的比例或组成的方法来进一步验证,而单单凭那3点就下结论呢。这个问题确实有待讨论,具体情况只有网友本人操作才知道,因为每个人操作过程不同,稍微有点不正确都会影响结果,液相就是那么麻烦。

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  • wh2008

    第9楼2013/07/25

    应该是试剂空白。

    这个问题不是我遇到的,是我看到网上的一个求助讨论。

    nixiaolong(nixiaolong) 发表:你的空白是走空针 还是进试剂空白?

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  • remioromen

    第10楼2013/07/25

    有这种可能性。

    wh2008(wh2008) 发表:你是说空白溶解将目标物洗脱下来了,所以导致每进样一次,就被洗脱一次,然后保留时间也一致?

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