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qingqingcao 老师讲HPLC 之 HPLC性能测试

qingqingcao

2013/08/21
药物分析

中药/天然药检测

HPLC仪器性能检查实验报告

1. 目的

了解HPLC仪器的基本构造和工作原理。掌握HPLC仪器基本操作

熟悉HPLC仪器性能检查的项目和方法

掌握HPLC色谱柱性能指标（有效塔板数，拖尾因子等）的测定方法，鉴别其优劣。

2. 原理

HPLC色谱仪性能指标

2.1. 流量精度 5分钟以 1ml/min收集纯水的重量，记录温度，并且查出对应的体积。计算其流量准确性。

2.2. 检测限——3倍信噪比。（根据中国药典规定）

2.3. 定性重复性（三次测试同浓度萘保留时间 RSD≤2%）

2.4. 定量重复性（三次测试同浓度萘峰面积 RSD≤2%）

2.5. 死体积——以纯水为流动相，以1ml/min流，用一段空管子连接，打一针甲醇。λ=224nm时候，看出峰时间。

2.6. 柱效，以萘为例子，做有效塔板数计算，拖尾因子计算。

3. 器材

3.1. HPLC

3.2. 色谱柱 C18 (5μm，4.6mm×150mm)

3.3. 100μl平头微量注射器

3.4. 超声波清洗器

3.5. 流动相过滤器，微孔滤膜

3.6. 真空泵

3.7. 容量瓶等

4. 试剂（药）

苯，萘，联苯，菲（AR）,甲醇（HPLC），超纯水

5. 试样配制

称取10mg上述四种样品到各自50ml容量瓶中，用正己烷溶解摇匀。吸取10ml各容量瓶中溶液，到同一个50ml容量瓶中，用流动相定容，摇匀。

萘溶液（做最小检测限）吸取1ml萘溶液，到100ml容量瓶中，流动相定容摇匀。在吸取1ml上述溶液到50ml容量瓶中，流动相溶解定容。此刻浓度为：

流动相配制：量取83ml甲醇，量取17ml超纯水到一个烧杯中，混匀，有机微孔滤膜过滤。超声波超5分钟，直至无气泡。

6. HPLC条件

流动相：甲醇-超纯水（83:17 v/v）

流速：1ml/min

波长：λ=254nm

7. 步骤

7.1. 死体积测定

纯水 1ml/min ，吸取20μl甲醇，注入色谱系统。

7.2. 流量精度测定（收集5ml）

7.3. 保留时间测试

分别注入：苯，萘，联苯，菲各个单一的样品，看保留时间。

7.4. 检测限测定

样品峰高h：噪音峰高h_N: 最小检测限：c1=2×h_N×c/h=

7.5. 重复性测定萘测试

8. 塔板数测试（以萘计算）

9. 思考

下次你测试的这根色谱柱塔板数少了许多，说明什么问题？

有效塔板数你认为它的意义是什么？

拖尾因子好坏说明色谱柱装填中有什么问题？

Ｔailing factor ＜ 0.95

Tailing factor =1.0

Tailing factor ≥1.05

精
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分
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qingqingcao

第1楼2013/08/21

这个实验，我在学校里面给同学们做了，同学们做了之后，他们对仪器的认识更加清楚。
由于这个实验，我在原有的基础上添加了拖尾因子测量，实际上，可以用HPLC自带软件计算，无需用原有的方法来计算。
相关的数据，我到学校补上，作为原创。

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精
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zhw19811005

第2楼2013/08/21

只有做过之后，对仪器的认识才会更加深刻

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wodedipan

第3楼2013/08/22

应助达人

去年我们五台agilent都是我做的，大体一致。楼主没有检测器的性能测试吗？

0

zyl3367898

第4楼2013/08/24

应助达人

可以在仪器上试试，印象会深刻。

0

xiaowang268

第5楼2013/08/25

现在的拖尾因子都是仪器自己算的啊
qingqingcao(qingqingcao) 发表:这个实验，我在学校里面给同学们做了，同学们做了之后，他们对仪器的认识更加清楚。
由于这个实验，我在原有的基础上添加了拖尾因子测量，实际上，可以用HPLC自带软件计算，无需用原有的方法来计算。
相关的数据，我到学校补上，作为原创。

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xiaowang268

第6楼2013/08/25

但是在药企一般很少做吧
zhw19811005(zhw19811005) 发表:只有做过之后，对仪器的认识才会更加深刻

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qingqingcao

第7楼2013/08/28

有的。等我到学校去，把数据找出来，写上呢。
wodedipan(wodedipan) 发表:去年我们五台agilent都是我做的，大体一致。楼主没有检测器的性能测试吗？

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翠湖园

第8楼2013/08/30

这篇原创数据就是补也不算少了，当然了，补多点更完美！
qingqingcao(qingqingcao) 发表:这个实验，我在学校里面给同学们做了，同学们做了之后，他们对仪器的认识更加清楚。
由于这个实验，我在原有的基础上添加了拖尾因子测量，实际上，可以用HPLC自带软件计算，无需用原有的方法来计算。相关的数据，我到学校补上，作为原创。

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xiaowang268

第9楼2013/08/31

检测器一般都是怎么做的呢？
qingqingcao(qingqingcao) 发表:有的。等我到学校去，把数据找出来，写上呢。

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xiaowang268

第10楼2013/08/31

感觉做的挺细的
翠湖园(hhx050) 发表:这篇原创数据就是补也不算少了，当然了，补多点更完美！

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