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液相色谱串联质谱法测定动物组织中地塞米松的残留量

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2013/10/08
x射线仪器

私聊

兽药/抗生素检测

液相色谱串联质谱法测定动物组织中地塞米松的残留量

摘要：采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱仪（LC-ESI-MS-MS），建立了鸡肉中地塞米松药物残留的检测方法，试验中鸡肉中地塞米松的残留用乙酸乙酯提取，以甲基强的松龙作为内标，提取液离心、浓缩后，经硅胶固相萃取柱净化，正己烷丙酮洗脱，洗脱液氮吹浓缩定容至1ml，供液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。本方法采用了0.5ug/kg,1ug/kg, 2ug/kg,10ug/kg，4个添加浓度，每个浓度6个平行样品，地塞米松药物残留的回收率在88%~105%，相对偏差在0.91%~4.1%。

关键词：液相色谱串联质谱法；地塞米松；鸡肉；

1引言

2012年央视早新闻再度曝光了山东滕州等地白羽鸡养殖户违规使用多种抗生素以及违禁激素药物催长白羽鸡的新闻。经过多地养鸡场进行调查后发现，为使白羽鸡“速生”，一些养殖户违规喂食抗生素、违禁药，地塞米松就是其中曝光的药品之一。为减少白羽鸡养殖过程中的死亡数量，每个养殖场都有自己的一套养鸡“秘笈”——给白羽鸡喂药，个别养鸡场喂药达20多种，18种是抗生素类药物。由于养鸡场每天给鸡喂大量的抗生素，导致一些病菌对抗生素产生耐药性，到养殖后期就有越来越多的鸡死亡。对此，养殖户想出的对策是，进一步缩短养殖周期，给鸡喂食一种特效药物地塞米松，以刺激鸡多采食。有些养殖户提供在鸡喂了35天以后使用地塞米松，鸡每天可增重二两以上，喂食三五天就能让鸡增重1斤左右。

地塞米松属于合成的糖皮质激素，具有消炎、抗过敏和抗休克等作用，由于其能提高饲料转化率，促进禽畜生长，因而广泛用于畜牧生产中，然而长期使用该类激素有很大的副作用，如扰乱体内激素分泌、降低免疫力、增高血压、骨质疏松、胎儿畸形等不良症状，动物生长过程中过量使用这些激素会导致其在动物源食品中的残留，影响人类健康。

2 实验部分

1.1仪器与试剂

1.1.1试剂和材料

甲醇：德国默克，色谱纯。

乙腈：德国默克，色谱纯；

乙酸乙酯：德国默克，色谱纯；

水：1.25L哇哈哈纯净水（杭州产）；

正己烷：Honeywell，色谱纯。

丙酮：德国默克，色谱纯。

氢氧化钠：分析纯。

鸡肉：取自养殖基地。

标准品：购置于DR公司,纯度>95%。

硅胶小柱：agela，500mg/6mL。

标准贮备液：称取各标准品10.0mg，分别放于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，4℃保存。

1.1.2仪器

液相色谱—质谱仪（LC-MS-MS） AB5500,ESI源、电子天平（美国奥豪斯）、旋转蒸发仪（瑞士Buchi）、冷冻离心机（德国贝克曼）、研磨仪（德国莱驰）、超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、棒状均质器（IKA T18）、涡旋混合器（IKA），固相萃取器（天津奔腾）。

1.2样品提取

称取组织样品（5±0.05）g于50ml离心管中，加乙酸乙酯15ml，涡旋混合，8 000r/min离心15min，移取乙酸乙酯层。于残渣中加0.1mol/L氢氧化钠溶液10ml，混匀，加乙酸乙酯20ml，涡旋混合，8 000r/min离心15min，移取乙酸乙酯层。合并两次提取液，40℃旋转蒸至近干，加乙酸乙酯1ml和正己烷5ml，溶解残渣，待净化；

1.3 样品净化

用正己烷6ml活化SPE硅胶小柱（500mg/6ml），提取液过柱。用正己烷6ml淋洗小柱，抽干，用正己烷-丙酮（6/4，V/V）6ml洗脱。洗脱液50℃氮气吹干，用流动相溶解过，过0.22μm滤膜，供LC-MS/MS检测。

1.4 色谱-质谱条件

液相条件：C18色谱柱，流速0.3ml/min，流动相1‰甲酸水和乙腈梯度洗脱。

质谱条件：电喷雾离子源，负离子扫描，多反应监测，雾化气、辅助气、气帘气、碰撞气调节气体流量使质谱灵敏度达到最佳。

3结果与讨论

3.1 色谱质谱条件的优化

流动相优化如下：

在ESI源下负离子扫描，根据化合物的响应和保留时间差异，雾化气、辅助气、气帘气、碰撞气调节气体流量使质谱灵敏度达到最佳。

定性、定量离子、碰撞能量如下：

3.2 线性方程

配置混合标准标准系列工作液，浓度为0，0.50，1.0，2.0，4.0，6.0，10.0ug/L。分别以选定的定量离子峰面积与内标物的峰面积的比值对浓度绘制标准曲线，地塞米松药物在0.50~10ug/L的范围内呈良好线性，r²均大于0.99。

3.3 回收率试验

取同一批阴性样品，加入适量的混合标准液，使加标量在0.5ug/kg、1ug/kg、2ug/kg和10ug/k四个浓度，每个浓度做6个平行，求其平均回收率，并计算批内相对标准偏差。

4结论

试验证明本方法简便、快速、准确,方法的定量下限为0.5ug/kg，高效液相色谱串联质谱法测定鸡肉组织中地塞米松残留达到目前国际上检测地塞米松激素残留的先进水平,可用于鸡肉中地塞米松激素残留的确证检测。

附下相关糖皮质激素的参考质谱资料

8种糖皮质激素的质谱参考条件，供大家参考：

附下40种糖皮质激素的质谱参考条件，供大家参考

参考文献

1：刘瑜, 赵颖, 李晓东, 金雁, 蒋施, 徐宜宏, 钟钰, 曾凡, 于丽, 周健南. 用超高效液相色谱-串联质谱法同时检测浓缩饲料中的多种兽药残留. 化学通报 , 2013, (02)

2：侯亚莉、徐飞、李海燕、周德刚、李晓薇、丁双阳液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法同时测定牛肉中地塞米松、倍他米松和倍氯米松残留中国农学通报 2008，（1）

3：吴敏; 郑向华; 齐士林; 洪煜琛; 周昱;超高效液相色谱-串联质谱测定猪肉中地塞米松、倍他米松和倍氯米松理化检验(化学分册)， 2010，（11）

4：周佳; 许敬东同时检测畜禽肉中呋喃唑酮、地塞米松残留高效液相色谱法的建立西北地区第六届色谱学术报告会甘肃省第十一届色谱年会论文集 , 2010 年

5：高卫东; 高效液相色谱法测定保健食品中的8种糖皮质激素中国食物与营养, 2012，( 12)

6：谭丽超; 葛峰; 单正军; 王懿; 固相萃取-高效液相色谱-质谱法测定污水中糖皮质激素分析化学, 2012,( 04)

7：李晓东; 张雅军; 丁丽霞; 液质谱联用鉴别八种糖皮质激素类药物的分析方法及其质谱裂解行为分析全国生物医药色谱学术交流会（2010景德镇）论文集 , 2010 :

8：徐锦忠; 张晓燕; 丁涛; 吴斌; 沈崇钰; 蒋原; 刘飞; 高效液相色谱-串联质谱法同时检测鸡肉和鸡蛋中合成类固醇类激素和糖皮质激素分析化学，2009,( 03)

9：曲彩红,苏向阳,张平,施文平. 高效液相色谱法测定复方尿素地米乳膏中醋酸地塞米松的含量儿科药学杂志 2010（16）

10：农业部1031号公告-2-2008 动物源性食品中糖皮质激素类药物多残留检测液相色谱－串联质谱法

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