我为检测而狂――NY/T761-2008检测方法的完美之路
【生活中的仪器分析】食品安全——“菜”米油盐酱醋茶大检测
《NY/T761-2008蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多种残留的测定》这个标准在农残检测中是应用最多的，该标准前处理简单，回收率高，准确率高，但是操作中会出现精密度差，回收率低或高的现象，如何把这个实验做得很完美，如何在这个检测方法的技术比武中胜出，作者经过长期的探索总结，分享给网友同行。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
GC450气相色谱仪（美国布鲁克公司），PFPD、ECD检测器，高速分散均质机(上海标本模型厂)、氮吹仪、快速混匀器。乙腈（色谱纯）、正已烷（色谱纯）、丙酮（色谱纯）、氯化钠（分析纯）。
1.2实验方法
采用《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法》（NY/T 761-2008）进行检测[1]。
1.3 标准溶液的配置
由农业部环境保护科研监测所提供，质量浓度均为100ug/mL，有机磷的标液用丙酮稀释至0.1ug/mL-0.2 ug/mL，有机氯的标液用正已烷稀释至0.1ug/mL- 0.2ug/mL。
1.4实验条件
有机磷检测条件色谱柱：VF-1701（30m×0.25mm×0.25um）；温度：80℃保持1min，以20℃速度上升到 130℃，再以5℃上升到200℃，再以15℃上升到250℃，保持11min。进样体积：1uL；进样品：250℃，不分流进样；检测器300℃；进样口温度：250℃；氮气流速：30mL/min；柱流速：2mL/min；空气流速： 17mL/min；氢气流速14mL/min。
有机氯的检测条件色谱柱：VF-1ms（30m×0.32mm×0.25um）；温度：80℃保持1min，以15℃速度上升到280℃,保持10.00min。进样体积：1uL；进样口：250℃，不分流进样；检测器300℃； 进样口温度：250℃，氮气流速：30mL/min；柱流速：2mL/min。
2 结果与讨论
2.1有机氯加标回收试验
2.1.1、配制标液百菌清、异菌脲、联苯菊酯为10ug/mL，分别吸这三种溶液400uL到两个25g空白蔬菜中，按NY761-2008进行前处理，同时吸这三种溶液200uL到10mL容量瓶中，用正已烷定容至刻度线，标液浓度为0.2ug/mL，结果见表1：
从表中可以看出两个问题，一是平行样品RSD较差，二是回收率有高有低。
2.1.2平行样品RSD较差的解决办法
办法一：将1号样品重复进样6针，发现峰面积越来越大，RSD>10%，初步确定是衬管或柱子受污染，先从衬管排除，更换新衬管、O型圈、进样垫，再次进1号样品，RSD<5%。
办法二：重新作前处理，同时吸乙腈50mL，在乙腈溶液中加入这三种标液，与蔬菜样品加入量一样，一起作前处理，结果见表2
从表2中可以看出，平行样品的RSD较好，回收率高，乙腈与样品的回收率相比较，可以看出样品多少还是有一些基质效应，但不影响结果。
接下来按同样的方法做12种有机氯的加标回收率，空白样品均为未检出，见表3
从表中可以看出，大多数农药的回收率均在83-115%之间，而氟氰戊菊酯、氟氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯回收率在120%，但是它们的乙腈加标回收率在98-110%之间，说明前处理是没有问题的，之所以加标回收率高是因为基质原因造成的。
2.2有机磷加标回收试验
2.2.1回收率高达160%的原因
配制标液马拉硫磷、对硫磷为10ug/mL，分别吸这两种溶液400uL到两个25g空白蔬菜中，按NY761-2008进行前处理，同时吸这两种溶液200uL到10mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度线，标液浓度为0.20ug/mL，上气相测定结果分别为0.26mg/kg，0.24mg/kg，实际加标量为0.16mg/kg，回收率高达160%，在前处理过程查找原因，认为是取样时取样量不均匀，取的菜汁多，菜样少，在称取样品时应该把粉碎过的菜样再次混匀，不能只取固体菜样或只取液体菜汁。
2.2.2回收率在120%以上的原因
重新对马拉硫磷、对硫磷进行了加标回收试验，在称取样品时将菜样混匀，结果发现两者回收率还在120%-140%左右，为此咨询了多位专家，查找了回收率高的原因。
2.2.2.1标液配制问题
首先假定前处理没有问题，那么最大的可能是标液配制有问题，如果标液峰面积大，那么在样品峰面积/标液峰面积时结果值会小，回收率会降低。
标液配制是这样的，吸200uL浓度为10ug/mL的标液，到10mL容量瓶中，用丙酮稀释至刻度，浓度为0.20ug/mL，进气相，测得峰面积；清楚了这一配制过程，那么10mL容量瓶需要校准一下，用移液枪吸200uL换成0.5mL刻度吸管吸200uL，刻度吸管也进行校准，定容至刻度后，塞紧容量瓶进行混匀，可上下颠倒容量瓶进行混匀，混匀后液体最好还在刻度线上，如果出现混匀后液体下降刻度线较多，说明瓶塞与容量瓶不配套，不能使用。移液枪与移液管的峰面积比较，见表4。添加量均为0.16mg/kg。
从表4可以看出，标液峰面积增大后，结果有所降低，但回收率还在100%以上，在前处理上查找问题。
2.2.2.2前处理细节
细节一：样品添加试验，在对样品进行回收率试验时，为了与配制标液的准确度一致，可用0.5mL刻度吸管吸400uL同一浓度的农药加入到空白蔬菜样品中，这样可消除误差。
细节二：匀浆后过滤时，滤液倒入滤纸时要低于滤纸边沿2cm，防止滤液倒得太多，溅在外面，滤液要完全收集完。
细节三：吸取10.00mL乙腈提取液时，用10mL大肚吸管，吸液前用该液润洗3次，使液体充满吸管内壁，吸取时刻度要准确。
细节四：氮吹近干的要求是小烧杯内潮潮的一层，如果吹干会回收率低，但本文讨论的是回收率高，所以氮吹时没有完全吹干，氮吹后加2mL丙酮，一定要加盖铝箔，这一步在排风橱中操作，如果不加盖铝箔，丙酮散发得快，很快就消失了，这样也会引起回收率高。在样品多时，操作速度要快，定容完一个立即进行下一个，为防止时间过长，丙酮挥发。
细节五：用丙酮清洗小烧杯的待测液时，最好在混合器上转圈洗烧杯底部，移入15mL刻度离心管中，用约3mL丙酮分三次洗烧杯，洗时也在混合器混匀清洗。
细节六：净化时淋洗弗罗里矽柱时，液面不要干，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，如果柱子表面干了再倒入溶液，农药会吸附在柱子上，回收率降低。
细节七：第二次50℃氮吹时，要求氮吹至小于5mL，可吹得小于1mL，这样做的好处是溶液中丙酮量会减少，用ECD检测时不会对ECD有损害。但不要吹干，会使回收率降低。
这四副图片分别为过滤、氮吹、定容、混匀（洗净小烧杯的液体）。
2.2.2.3衬管与色谱柱问题
当这些细节问题都注意到，所有农药的回收率仍在100%-120%时，要从气相方面找找原因，如果衬管与色谱柱受污染，会出现标液峰面积与样品峰面积有增大现象，但两者是不同步的，样品峰面积增大的系数远大于标液峰面积，这样也容易出现回收率高的现象。
排除这些问题后，加标回收率可以做到90%-100%，彻底解决了回收率高的问题。
2.2.2.4样品基质问题
大多数农药的回收率会在70-120%之间，但是甲胺磷、氧化乐果等强极性农药，有较强的基质效应，回收率会高达400%，解决的办法是同一样品的基质配标液，例如找一空白样品，按方法进行前处理，最后定容至5mL，用这5mL配制标液，进气相测得峰面积，用来计算样品中甲胺磷、氧化乐果的回收率，这样就大大减少了基质效应。
3结论
NY761-2008是较为简单的一种方法，在这个方法中有机氯前处理比有机磷要复杂些，要过弗罗里析柱与第二次氮吹，所以它不容易出现回收率高的问题，而有机磷的前处理较为简单，容易出现回收率高的问题，这时可从四方面来考虑，标液的配制过程，前处理的细节，气相方面的干净程度、样品基质效应等，试验没有简单复杂，看我们的重视程度，只有把检测当做一种兴趣，把结果完美当种一种追求，才能不断提高自己，让工作充实而快乐。
我在做这个方法中遇到过回收率低、回收率高、精密度差的问题，为了解决这些问题，我将它们拍成照片，在网上寻师问药，整个过程长达7个月。在此我感谢素未谋面的仪器信息网的网友Charles中国农业科学院茶叶研究所张新忠博士、中国农业科学院植物保护研究所董丰收研究员、中国农业科学院环境保护与监测研究所陈珊珊老师等，也感谢仪器信息网，让我结识这么多专家学者，得到这么多的指导与帮助，使我在实际工作中能够得心应手，顺利通过能力验证，还在今年的全省农产品检测技术比武中名列前茅，感谢您们。
我爱检测！我为检测而狂!
参考文献
[1] 中华人民共和国农业部发布，NY/T761-2008 蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多种残留的测定. 北京：中国农业出版社，2008：1-25
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