中药白茅指纹图谱初步研究

wangshirf

2013/12/31
x射线仪器

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中药/天然药检测

摘要：目的：采用高效液相色谱法建立白茅指纹图谱，并进行分析比较。方法：应用HPLC法测定白茅饮片的指纹图谱，用Kromasil Ｃ18(46×150ｍｍ,5μｍ)色谱柱,0.05%冰醋酸溶液—甲醇为流动相,采用梯度洗脱,流速1.0ml/min,检测波长320nm。结果：初步建立了白茅饮片的指纹图谱，其精密度、重现性、稳定性试验中共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%。结论：该方法简便、准确、重复性好。

关键词：白茅;指纹图谱

白茅为禾本科植物白茅（Imperata cylindrica Beauv. var. major(Nees) C. E.Hubb.）的干燥根茎^[1]，是常用中药，自魏代沿用至今，始载于《神农本草经》^[1]并列为草部中品，味甘，性寒。主劳伤虚嬴，补中益气，除瘀血，血闭寒热，利小便。常用于血热妄行的多种出血证，热淋。目前，人们对白茅研究在质量控制方面比较肤浅，2010版《中国药典》也没有明确给出白茅的含量测定方法，生品与炮制品皆缺乏质量控制标准和行之有效的检测手段，本实验对白茅的指纹图谱进行初探，并进行了相似度数据计算，为充实其质量标准研究提供有关资料。

1.方法学研究

1.1仪器与试药

Waters515高效液相色谱仪,Waters 2487双波长紫外检测器（Waters 2487 Dual λ Absorbance Detector），2002 Waters公司 Empower pro 工作站（美国Waters公司），KQ-500B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），色谱柱:中科院大连化学物理所，C18柱：Kromasil C18(4.6×150mm，5μm)，乙腈为色谱纯（美国Tedia公司，批号：040702），甲醇（色谱醇，江苏汉邦科技有限公司，批号：004072166）。娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）；冰醋酸为分析纯(AR级) （广东•汕头市西陇化工厂）；绿原酸对照品（供含量测定用，批号：110753－200413）,购自中国药品生物制品检定所；白茅饮片均购自不同产地见表1。
表1 十批不同产地的白茅

序号
产地
白茅
饮片编号
1
安徽
生1
2
湖北
生2
3
湖南
生3
4
江苏
生4
5
浙江
生5
6
河北
生6
7
山西
生7
8
山东
生8
9
安徽
生9
10
江苏
生10

1.2供试品的制备

十批白茅粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，摇匀，称定重量，静置1h，超声处理45min，放冷，称定重量，用甲醇补足失重，摇匀，过滤，滤过(0.45μｍ微孔滤膜)，取续滤液，作为供试品溶液。

1.3检测方法

1.3.1 试验过程中选择了3种流动相系统：

①甲醇-水；②乙腈-水；③甲醇-0.05%醋酸。梯度洗脱，结果表明以甲醇-0.05%醋酸系统最为简便，峰最多。

表2 梯度洗脱时间程序表

时间（min）
流量(ml)
甲醇（%）
0.05%HAC(%)
0
1.00
5.0
95
10
1.00
20
80
25.
1.00
20
80
35
1.00
25
75
50
1.00
25
75

1.3.2 检测波长的选择

通过PDA检测器对样品进行波长190－400nm处扫描。并查阅文献，试验过程中共选择了280nm、254nm、320nm三种波长，白茅饮片在三种检测波长的HPLC图谱中均有多个色谱峰，经过综合比较，茅根在检测波长为320nm时色谱峰较多，峰吸收度较大且峰形较好，故选择320nm为指纹图谱的测定波长。

1.4方法学考察

1.4.1稳定性及精密度试验

以编号为1的生品的制备样品供试液，1d内连续进样7次，记录各共有峰和积分面积，以参考峰（RT≌15.4min）的保留时间和积分面积为参照，换算出各个共有峰的相对保留时间和相对积分面积。结果显示，茅根饮片的制备样品在1天内通过HPLC分析结果稳定，共有峰的（相对）保留时间和（相对）峰面积基本一致，相对标准偏差均小于3.0%。

1.4.2重现性试验

取编号为1的生品5份，按上述方法进行制备并进行检测，考察各色谱峰相对保留时间、峰面积比值的一致性。结果表明，所考察的共有峰的相对保留时间及相对峰面积具有较好的重现性，其中参考峰的相对保留时间和相对峰对峰面积的RSD小于3%。

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第1楼2013/12/31

2.指纹图谱相似性

以共有模式为参照，通过《中药指纹图谱相似度计算软件》计算，得到各批次药材色谱指纹图谱。结果表明各供试品相似度未达到90%以上。

表2 建立共有模式的10批生品的相似度数据

Table.7-3 degree of similarity date of 10 batchesImperata cylindrica of generation which based common mod

S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10	对照指纹图谱
S1	1.000	0.955	0.950	0.956	0.948	0.949	0.922	0.914	0.901	0.929	0.967
S2	0.955	1.000	0.990	0.998	0.991	0.996	0.943	0.935	0.909	0.977	0.997
S3	0.950	0.990	1.000	0.992	0.996	0.994	0.947	0.908	0.872	0.972	0.993
S4	0.956	0.998	0.992	1.000	0.992	0.995	0.952	0.938	0.907	0.976	0.998
S5	0.948	0.991	0.996	0.992	1.000	0.994	0.946	0.911	0.881	0.970	0.993
S6	0.949	0.996	0.994	0.995	0.994	1.000	0.941	0.909	0.878	0.977	0.994
S7	0.922	0.943	0.997	0.952	0.996	0.941	0.918	0.918	0.913	0.910	0.957
S8	0.914	0.935	0.908	0.938	0.911	0.909	1.000	1.000	0.973	0.921	0.942
S9	0.901	0.909	0.872	0.907	0.881	0.878	0.913	0.973	1.000	0.867	0.914
S10	0.929	0.977	0.972	0.976	0.970	0.977	0.910	0.921	0.867	1.000	0.978
对照指纹图谱	0.967	0.997	0.993	0.998	0.993	0.994	0.957	0.942	0.914	0.978	1.000

图1 白茅样品对照指纹图谱

图2 十批样品指纹图谱

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第2楼2013/12/31

3.讨论

3.1 中药指纹图谱系指中药原料药材、饮片、半成品、成品等经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其特性的共有峰的图谱。中药指纹图谱是一种综合的、可量化的化学(不包括生物学)鉴定手段。借以鉴别真伪、评价原料药材、半成品和成品质量均一性和稳定性。其基本特性是整体性和模糊性

3.2采用HPLC色谱法，初步建立了茅根饮片的50%甲醇提取液指纹图谱分析方法，实验结果表明，10个批次的茅根饮片指纹图谱中主要峰群的整体图貌基本一致，10个批次的白茅饮片图谱的相似度达到90%以上。结果表明：方法稳定，可靠，重现性好。

3.3 中药化学成分的多样性与复杂性是其发挥疗效的物质基础, 在其有效成分尚未被阐明的情况下, 只采用单一或少数几个成分做指标进行质量评价是不够的[2]，往往指纹图谱可以发挥其整体性和模糊性，在中药质量控制方面有着其独特的作用。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国（一部）北京：化学工业出版社，2010：99
[2]范丽芳，王巧，张兰桐.河北道地药材紫菀指纹图谱研究[J]中草药，2007,38(10):1566