浪淘沙隐
第7楼2014/05/21
看样子楼主还不太明白反相HPLC的分离原理,可以多了解下。在反相HPLC中,物质的保留是和有机相比例呈反比的,有机相越多,保留越弱,反之越强。所以如果你一开始就尝试大比例的有机相,那么一些物质的保留就减弱,分离度也就随之降低。所以RP-HPLC都是从小比例有机相过度到大比例有机相的。
对于RP-HPLC来说,不同的有机溶剂,其洗脱能力是不一样的,对于一些化合物的选择性也不一样(具体表现为保留时间、分离度),所以,当你的方法中有2个峰分离度不好时,可以尝试使用其他溶剂,比如甲醇或四氢呋喃,说不定会有惊喜。但是更换溶剂时,需注意方法中化合物的稳定性,有些物质在甲醇中可能不稳定。
但是,这些都是很麻烦的事情,楼主你一直没说明用的是什么色谱柱。如果你使用的是15cm的柱子,那么换个25cm的柱子是个不错的选择,很有可能立刻就解决问题了。