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HPLC系统各部件的认识及使用注意事项

aiyinc

2014/09/12

液相色谱（LC）

针对HPLC使用过程中出现的一些问题，作为一名售后服务工程师，根据自己长期在安装和维修过程中总结的经验，简单谈一谈HPLC系统各个单元部件使用注意事项。一套HPLC系统大致分为以下几个部分：流动相前处理部分、输液部分、进样部分、分离部分、检测部分和数据采集处理部分。下面分别介绍一下各部分的使用方法和注意事项。

一、流动相前处理部分

HPLC的流动相前处理主要包括溶剂过滤器、真空泵和超声波。HPLC所用流动相必须预先过滤和脱气，过滤的作用是防止颗粒性的杂质堵塞系统，或影响单向阀的正常工作。过滤时需要注意滤膜的选择，有机和水系膜必须分开使用。曾经发现有操作人员因为错用水膜过滤有机溶剂，而滤膜溶解又未及时发现，从而导致泵流路和色谱柱的堵塞。流动相超声的作用是去除其中的气泡，以保证系统的稳定。流动相超声一般在20min左右即可，超声后，液体温度会升高，应冷却到室温使用。超声的流动相需要当天使用，隔天使用需要再次超声。

二、输液部分

HPLC的输液部分即是指高压恒流泵。恒流泵的基本要求是能够提供稳定的流速，这里对泵的几个主要部件及其使用注意事项进行一下说明。

吸液过滤头，或称沉子，主要作用是过滤流动相中可能存在的颗粒性杂质。长时间使用后，堵塞在吸液过滤头表面的杂质，会造成吸液不畅，或导致管路里混入大量气泡。所以需要注意应定期对吸滤头进行超声清洗，清洗溶剂可以选择乙醇或者30%稀硝酸溶液。

单向阀的作用是确保液体向一个方向流动，是高压恒流泵稳定输液的保证。日常使用过程中，可以通过观察压力的情况，初步判断流量是否正常。如果系统已经平衡一段时间，压力应该是稳定的。但如果压力存在波动，则表明流量不稳定；如果无压力，则表明无流量。这两种情况大多是因为单向阀里混入了气泡或被污染了，所以这就要求流动相在使用前必须经过过滤和脱气处理。流动相出现气泡，应把放空阀打开，按冲洗键将里面的气泡排出即可。如果单向阀被污染，那么必须要对单向阀进行清洗。一般仪器的说明书都有对单向阀的清洗方法，可以参考使用。

柱塞杆的运动作用是吸入液体，而密封圈是固定在柱塞杆上防止吸入泵腔内的液体泄漏，是保证泵头输液正常的关键部件。但是当使用含盐的流动相时，由于脱水或蒸发，有可能在柱塞杆密封圈的后面形成晶体。泵运动时这些盐晶体会损坏密封圈和柱塞杆，因此最好每天实验前和实验后都要用纯净水冲洗一次密封圈（在柱塞密封圈和二级密封圈之间），保持清洗管内有水以防止形成晶体，延长柱塞杆和密封圈的使用寿命。

三、进样部分

HPLC的进样装置分为手动进样阀和自动进样器。对于手动进样阀使用过程中需要注意每个样品进样完成后需要对进样阀进行清洗，防止残留对下一个样品分析的影响。还需要注意进样方式，以20μL定量环为例，我们可以选择完全充满定量管技术或部分充满定量管技术。为了保证进样的重复性，选择完全充满定量管进样方式时，需要注入定量环体积3倍以上的样品；选择部分充满定量管进样方式时，进样体积应在定量管体积一半以下。如果采用自动进样器进样，首先需要保证注射器里面没有气泡存在，否则影响进样量准确性；其次是样品瓶里面有足够的样品，保证进样针能够吸到样品。为了避免交叉污染需要定期对样品瓶、盖和垫进行清洗。

四、分离部分

HPLC的分离部分一般包括保护柱、柱温箱和色谱柱。

色谱柱是样品分离的核心。色谱柱在使用前必须先阅读说明书，了解色谱柱使用的pH值范围、溶剂范围、压力范围和维护方法等事项。色谱柱使用结束后，必须要及时对色谱柱进行清洗。冲洗完成后，应该将色谱柱从仪器上拆下来，两端用厂家配的堵头密封后，保存在色谱柱盒里。

保护柱的主要作用是提供对色谱柱的保护，防止吸附性强的杂质对色谱柱污染。针对不同型号的色谱柱，应选择相对应填料的保护柱。注意的地方是柱芯也是有寿命的，应该定期进行更换。

色谱柱温度变化，可能会导致保留时间的变化。为了避免这个问题，我们建议在色谱柱上加一个柱温箱。

五、检测部分

HPLC常用的检测器是紫外检测器。在日常使用过程中紫外检测器主要需要注意检测池和氘灯的使用与维护。检测池长时间使用可能会造成污染，如果仪器的能量偏低，可以对检测池进行清洗。对于氘灯来说，使用过程中应该注意不要频繁的开关氘灯，以保证氘灯使用寿命最大化。

六、色谱数据采集处理部分

色谱数据采集、处理是由色谱数据处理工作站完成。目前大多数工作站还具有仪器控制的功能。不同厂家的工作站的操作会有差别，但一般经过培训和一定时间的使用都可以掌握。

以上是本人从事HPLC安装、维修职业生涯中总结的一些经验和见解，希望能对刚接触HPLC的朋友带来一些帮助。

分
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老多_小多

第1楼2014/09/12

进样器这样设计是为了方便吗

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zyl3367898

第2楼2014/09/12

应助达人

图中的进样针是自动进样，还是手动进样，楼主的很多经验与气相很像，比如进样、色谱柱、检测器等的维护与保养。

0

wajer

第3楼2014/09/13

应助达人

LZ是该仪器的厂家工程师？说得很详细，学习了

0

bingwang228

第5楼2014/09/13

应助达人

过滤头长时间放在缓冲盐或水相中会长菌，造成吸液不畅、产生气泡的情况，用完需要及时清洗，放入空瓶或者有机相中。

0

上党之巅

第6楼2014/09/14

应助达人

明显手动进样。
zyl3367898(zyl3367898) 发表:图中的进样针是自动进样，还是手动进样，楼主的很多经验与气相很像，比如进样、色谱柱、检测器等的维护与保养。

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999youran

第8楼2014/09/14

图文并茂，学习了

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bingwang228

第9楼2014/09/14

应助达人

第一张图，那个装有液体白色瓶盖的小瓶子有什么用途？像是一个缓冲瓶

0

ldfbee8219

第10楼2014/09/17

什么品牌的，最好给些操作事项

0

bingwang228

第11楼2014/09/18

应助达人

图上有标识的，大连依利特。
ldfbee8219(ldfbee8219) 发表:什么品牌的，最好给些操作事项

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dyd3183621

第12楼2014/09/19

不是一个品牌的，参考下

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