两种物质一直完全分不开！

换根柱子试试

实验室没有别的柱子，都是C18的，一根150mm，一根250mm。。

采用梯度洗脱试试，要不换换检测波长什么的

还有pH值、盐浓度、比例……。或者对溶液进行预处理。是在不行换种方法测吧

应助达人

使用碱性缓冲液呢？

你是依据什么方法来的？

是DAD检测器，可以全波段扫描的。。最无语的是两个物质的光谱图都一样。。

完全分不开是什么意思？是只有一个峰还是能看出来峰不纯没分开？如果是只有一个峰，而你又调了流动相还是分不开，那么考虑可能在这个运行时间内另一个峰没有从色谱柱洗脱下来，建议延长分析时间。如果是峰不纯没分开，建议用有机相比例从5到100进行等度尝试，应该不会一直分不开吧？

应助达人

两者的保留时间为多少？这个很重要。
从你给的信息来看，这2个化合物的极性还是挺大的，如果无保留的情况下，二者会同时出峰的。