求助各位牛人，我的液相色谱峰分不开，怎么办？

图片可以上传啊，多试几次，选中图片后点上传就可以。

你的图片没审核通过吧？

还要审核通过？我点了很多次上传，大小也没超限，就是不显示

应助达人

我想知道现在这个方法的来源是什么。
（1）待分析的三种物质保留时间相近，说明极性相差不大，如此为何选择梯度洗脱
（2）为何选择甲醇和乙腈的混合溶液作为流动相？分析方法的条件一般，来说是越简单越好。
（3）水相中加入0.3%甲酸，应该是为了调节pH以改善酸性物质峰形，以及增强保留。
我会从以下方面开始：
A 待分析化合物在你所用条件下几乎同时出峰，优先考虑等度洗脱，有机相从经济实惠及毒性上考虑，优先采用甲醇。（但乙腈的峰形更好，柱压较低）
B 对于待分析化合物为黄酮，属于多酚羟基类，有一定的酸性，查阅出待分析化合物的pKa值，按照我的感觉0.3%的甲酸的酸度应该还不够，可以考虑增强水相的酸性，主要为两种：1.按照中药分析习惯，可以将水相改为0.1%磷酸（适当调节磷酸浓度，使得pH值在2.0左右）2.按照化药的分析习惯，取3.6g KH2PO4到1L水，用磷酸调节pH至2.5左右。
C 根据目前20%有机相到25 min才出峰。若现在选用甲醇作为流动相，至少应将甲醇的比例调至30%以。
当然，具体调整还得依据所得色谱结果进行。

应助达人

可以上传，验证一下就行，楼主再发一下试试

图片上传成功了，谢谢大家的回复！这次有图了，还希望大神们多给些建议！

是别人用安捷伦液相摸出来的，柱温30℃，我用岛津的，没有柱温箱，室温20度

应助达人

也许是柱温的问题，但我更愿意相信是0,3%的甲酸配置不同而导致的。

戏外，这个梯度走的很无聊。

谢谢您的细致的回复！能具体说一下甲酸的问题吗？我今天了解了一下，人家用的是色谱纯甲酸，我用的是分析纯的甲酸······