蛋白纯化与SEC两种系统的连用

蛋白纯化与 SEC 两种系统的连用

一些生物实验室总需要做蛋白纯化，但是同时需要做蛋白的纯化结果的监测。一般而言纯化和监测是分两步来进行的。GPC/SEC是一种监测分离纯化的一种手段，那么我们是
否可以把两大系统连接使用呢?答案是肯定的，下面就通过两种不同型号产品的连接来举例实现这项功能！本文只是说明方法，涉及到的品牌仅供参考。

仪器配置：
1， Malvern Viscotek-270 system（or OmniFACE system）
2， GE Äkta pure systems（P900/UV900/Manual Injection system）

需要配件：
1， Malvern Viscotek
1） GPC4354 Trigger Box Conversion Kit 触发配件包

AKTA 连接方式

注意，这个配件包里面包括GPC0293用于 Agilent cable和GPC2970 用于 AKTA cable两个触发线，九针连接方式不一样。如果连接Äkta的设备触发盒子也不需要外接5V供电源；如果没有现成的触发盒子，我们可以用两根线来代替，另外需要去五金店去淘宝相应激发芯片。

2） CAB0310 Cable 6 Pin mini din AKTA-UV UV模拟信号输出线

这个配件一般AKTA 配件箱中会配置一根，但多数情况下，实验者可以通过寻找配件箱来找到 ；

2， 如果是新的GE Äkta pure systems 系统，那么会配有外接模拟盒子：GE (I/O-box E9, Part NO. 29-0113-61)。

连接步骤：

第一，连接 UV 信号到 270：

CAB0310 Cable 6 Pin mini din AKTA-UV 用CAB0310连接到Äktas UV检测器后面标有0-1V模拟信号输出端，此端口是一个6孔输出。我们需要的信号是1号和2号孔。注意1号口是高电平输出，2号口是接地。1号口对应我们输出端黑色的线连接到270的UV-Hi端，2号口对应输出是红色线连接到270的UV-Low端。输出端黄色线悬空不用。我们可以通过万用表笔来测试通断哦，也可以翻开Unicorn泵手册来确认。

第二，连接触发段子：
1， 把触发盒子，连接线GPC2970分别连接到相应的位置，最后再通电。GPC2970 标有autosampler 的一端接到akta设备下端 P900pump后面的remote上。注意不要连
接到UV上或者其他remote口上。GPC2970 R232九针接头的公共端连接到触发盒子上，不用连接外接5V供电电源。AKTA设备提供此5V电压给触发盒子，这时指示灯为红色。输出端的黄色，黑色，红色线头分别依次连接到270Dualdetector后面的INPUT(1V/F.S), Trigger-GND, Trigger-SW位置。

注意：连接触发盒子的电源最后通电，并在使用中不要突然断电。

第三，在 GE Unicorn Manager 软件中根据实际情况设定外部触发事件。打开控制主界面，设置选择如下：
1. Administration
2. System Setup
3. Edit – Component Aux Equipment activate

返回到主控界面，在 Manual中选择pump设置选项会出现外部事件选项。一般情况下显示为： AuxOut (1,, 2, 3,4),根据不同的型号会显示不同的事情顺序号。可以被设定为0或者1，代表在0.01s内发出瞬时高电平或者低电平，从而触发270检测器采集盒。可以手动测试选出相应的事情号码。现实情况可能需要根据实际仪器配置情况来定，一般在中国，ATKA型号选择事情3设定为0，即为触发信号：(Aux 3 =0 was used for old style trigger interface as power supply and aux1 triggered injections).

第四，设定进样和触发命令，完成进样并在 Omnisec 采集数据：
1． Pump – AuxOut3=0
2． Flow Path – Injection Valve=PositionInject
3． 在Omnisec中编辑序列，点击开始运行样品按钮，出现等待waiting for trigger
4． 在Unicorn Manager 主控界面点击

5． 完成进样的同时Omnisec软件开始采集数据。