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疏水层析柱在液相上条件优化

液相色谱(LC)

  • 大家好
    请教个条件优化的问题,在液相上走疏水柱走抗体偶联药物,(8个不同等电点的蛋白峰),bufferA是高盐硫酸铵,bufferB是低盐,五个峰一直分不开,而且是峰不高,但走峰时间较长。尝试优化了bufferB的梯度,或者改变buffer的1pH值,都不行。大家有经验的有什么好的建议?谢谢啦。

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  • 有水有渝

    第1楼2016/03/16

    应助达人


    把色谱条件说清楚一下,包括色谱柱型号、填料,流动相组成,检测器等。

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  • tdwinner

    第2楼2016/03/16

    流动相是 bufferA: 50mM 磷酸盐,1.5M硫酸铵,5%体积比异丙醇,pH7.0
    bufferB: 50mM磷酸盐 , 20%体积比异丙醇,pH7.0
    柱子是 7.5?75mm, Ethe-5PW column (Tosoh Bioscience)
    检测器是DAD检测器,波长280nm

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  • 有水有渝

    第3楼2016/03/17

    应助达人

    这个是标准方法吗,这么复杂的没有做过,首先色谱柱的孔径选择与分子量大小是否相适应,另外不同等电点在PH7.0下分别是什么状态,在这个条件下是否都稳定。

    根据等电点进行梯度PH变化是否可行?

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  • tdwinner

    第4楼2016/03/18

    谢谢回复
    不过疏水柱应该不用考虑孔径吧, 抗体应该偏酸性,这样在pH7下都应该为负电,在高盐下应该都稳定
    梯度pH应该是等电聚焦毛细管的方法

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