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GPC分析中流动相纯水和加盐的区别,为何出峰会有很大差异?——请大神救急

凝胶色谱(GPC)

  • 本人是GPC新手,仪器调试好后,在分析中碰到了一些问题,请求大神帮忙分析,谢谢。
    样品为萘磺酸甲醛缩合物,柱子为PLaquagel-OHMIXED-M 8um 300×7.5mm,分析条件:流速1ml/min,柱温和检测器温度为35℃。
    用纯水做流动相时,50万分子量的标样(PEG)保留时间为5.1min左右,而试样在4.1min有一个很大的峰出现;用加盐(0.1M硝酸钠和0.01M磷酸氢二钠)流动相,试样分析时4.1min的大峰消失了。
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  • 小不董

    第1楼2016/11/07

    应助达人

    加缓冲盐后,检测器purge了吗?有溶剂峰吗?
    另在没有缓冲盐时,你的样品可能不是按照体积排阻来分离的,就一根柱子?4.2min出峰有点早,明显不对了。

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  • 徐松

    第2楼2016/11/08

    加缓冲盐后,检测器purge了。溶剂峰有的,流速1ml/min,保留时间在9.4min左右。
    纯水流动相谱图:

    加盐后谱图:

    差异很大,麻烦版主帮我分析下原因,万分感谢。

    小不董(doxw0323) 发表:加缓冲盐后,检测器purge了吗?有溶剂峰吗?
    另在没有缓冲盐时,你的样品可能不是按照体积排阻来分离的,就一根柱子?4.2min出峰有点早,明显不对了。

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  • 小不董

    第3楼2016/11/08

    应助达人

    加了缓冲盐后,基本正常了,但你最好还需要做些试验,一个是你的样品是什么离子型的?pH如何,是否需要调节pH,加什么缓冲盐比较适合,缓冲盐的浓度至少要加到没有第一个图的那种情况。

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  • 小不董

    第4楼2016/11/08

    应助达人

    磷酸盐是调节pH的,这个是选择加的, 有的加磷酸二氢钾,有的加磷酸氢二钾,就看你的样品决定的。
    硝酸钠是比较普遍的缓冲盐,也有人使用醋酸钠。
    这些盐的选择都是看你的样品的。你可以查查样品测试文献,资料。

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  • 徐松

    第5楼2016/11/09

    谢谢版主,我的样品是阴离子型,亲水性,pH值在7-9之间。
    为什么流动相不加盐,用纯水,我的样品分析时,会出现那样的情况?

    小不董(doxw0323) 发表:磷酸盐是调节pH的,这个是选择加的, 有的加磷酸二氢钾,有的加磷酸氢二钾,就看你的样品决定的。
    硝酸钠是比较普遍的缓冲盐,也有人使用醋酸钠。
    这些盐的选择都是看你的样品的。你可以查查样品测试文献,资料。

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  • 徐松

    第6楼2016/11/09

    我的缓冲盐是加了0.1M硝酸钠+0.01M磷酸氢二钠。

    小不董(doxw0323) 发表:磷酸盐是调节pH的,这个是选择加的, 有的加磷酸二氢钾,有的加磷酸氢二钾,就看你的样品决定的。
    硝酸钠是比较普遍的缓冲盐,也有人使用醋酸钠。
    这些盐的选择都是看你的样品的。你可以查查样品测试文献,资料。

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  • 小不董

    第7楼2016/11/09

    应助达人

    由于你的

    的样品是阴离子型,亲水性,pH值在7-9之间。显碱性,在凝胶色谱分离时,需要尽量消除OH(羟基)的化学键作用,所以流动相需要加盐,和pH缓冲盐。
    在你样品溶解时,也要用含有缓冲盐的流动相来配置溶液。
    配置样品溶液的浓度在保证信号的前提下也尽量的小,更好。

    徐松(v3140611) 发表: 谢谢版主,我的样品是阴离子型,亲水性,pH值在7-9之间。
    为什么流动相不加盐,用纯水,我的样品分析时,会出现那样的情况?

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  • 徐松

    第8楼2016/11/09

    谢谢版主的分析,受教了

    小不董(doxw0323) 发表: 由于你的

    的样品是阴离子型,亲水性,pH值在7-9之间。显碱性,在凝胶色谱分离时,需要尽量消除OH(羟基)的化学键作用,所以流动相需要加盐,和pH缓冲盐。
    在你样品溶解时,也要用含有缓冲盐的流动相来配置溶液。
    配置样品溶液的浓度在保证信号的前提下也尽量的小,更好。

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  • 北方海盗

    第9楼2017/01/20

    请加微信交流,zorro_zheng,加时请提示色谱。

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