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MRM峰型拖尾,如何改善峰型

液质联用(LCMS)

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  • 我要检测的一个化合物带有很多个酚羟基。HPLC检测时,流动相的ACN和水中都加了0.2%的乙酸或者直接加0.2%的磷酸来控制峰型,结果还可以。上UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]LC-MS后,用的是乙腈:0.1% 甲酸的流动相,常规的梯度洗脱。5cm x 1.7um的小柱子。ESI- 响应良好。唯一的问题是拖尾,见下图。已经将流速提到0.6ml/min了,但是用于定量仍然不理想。曾经提高过甲酸的浓度,但是对响应影响较大,甚至-ESI没有响应了,如何在响应和峰型上做出选择,真的很头疼。ESI+的响应不好。
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  • weiqing1983

    第1楼2016/12/05

    应助达人

    可以改变一下流动相的梯度试试。

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  • 20071940xu

    第2楼2016/12/05

    流动相梯度是多少呢,建议调整下梯度

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  • weiqing1983

    第3楼2016/12/05

    应助达人

    也可以在流动相里面加点缓冲盐比如5mM乙酸铵等,负模式可以在样品最后复溶时加点氨水,帮助其离子化,效果会好一点。

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  • amugong

    第4楼2016/12/05

    建议用乙酸铵,另酚羟基很多,极性很大,柱子换成HILIC柱增加保留

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  • syzhudi

    第5楼2016/12/05

    0.3min 10%ACN; 2.5min 95% ACN; 4.5min 95%ACN; 4.7min 10%ACN; 6min 10%ACN。目标化合物极性偏小,C18柱保留时间比较长,试了几个梯度,这个梯度算是出峰比较快的了,但是仍然不太好,没有在有效洗脱段出来,只能调到高有机相段了。您看看这个怎么调整呢?

    20071940xu(20071940xu) 发表:流动相梯度是多少呢,建议调整下梯度

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  • syzhudi

    第6楼2016/12/05

    0.3min 10%ACN; 2.5min 95% ACN; 4.5min 95%ACN; 4.7min 10%ACN; 6min 10%ACN。试了几个梯度,这个梯度算是出峰比较快的了,但是仍然不太好,没有在有效洗脱段出来,只能调到高有机相段了。您看看这个怎么调整呢?

    weiqing1983(weiqing1983) 发表:可以改变一下流动相的梯度试试。

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  • syzhudi

    第7楼2016/12/05

    我这个化合物结构比较复杂,C18柱保留时间很长。HILIC柱我估计要更靠后,再摸索摸索吧。乙酸铵以前我在+ESI模式下用过,是为了给一个很难离子化的化合物挂个NH4+。我是搞生物的,对于化合物检测真的是个门外汉,还要多向你们学习学习。

    amugong(amugong) 发表:建议用乙酸铵,另酚羟基很多,极性很大,柱子换成HILIC柱增加保留

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  • 东海710

    第8楼2016/12/06

    应助达人

    这个物质极性较小,建议增加有机相比例,此外,换柱子再试试;

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  • amugong

    第9楼2016/12/06

    羟基多,极性大,C18柱一般要加酸会使峰形和保留都有改善,但[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp]液质的负源加酸响应会变低,加乙酸铵也会使峰形变好,hilic出峰如果慢,水相比例加大即可,浓度到10-20mm试一下。

    syzhudi(v2952102) 发表: 我这个化合物结构比较复杂,C18柱保留时间很长。HILIC柱我估计要更靠后,再摸索摸索吧。乙酸铵以前我在+ESI模式下用过,是为了给一个很难离子化的化合物挂个NH4+。我是搞生物的,对于化合物检测真的是个门外汉,还要多向你们学习学习。

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  • syzhudi

    第10楼2016/12/09

    增加有机相比例是有效果的。我把95%的高有机相改到100%,流速加大。得到了下面的图,明显改善了拖尾。但是又有了新问题,这个梯度洗不干净柱子上的目标化合物,影响定量。我这个化合物是个柱前衍生得到的产物。没有标准品,文献里也没有具体说明,实验结果应该显示极性比较小的,我试了下很多有机试剂都能溶蒸干的固体,但是溶解性最好的是DMSO和丙酮,异丙醇或者极性再小点的乙醚,己烷都溶不好,甲醇比乙腈溶解性稍微好一点。我现在用的是ACN的流动相,换成甲醇响应会高5倍左右,但是峰型很差,同样洗不干净。。进样针已经设置成进样前后各用纯甲醇洗10s,空白样品仍然有较高的残留。我判断应该是色谱柱残留。我想问下对于这种亲脂性,弱酸性的物质(带两个苯环),有更合适的色谱柱来分离吗?

    东海710(v2945599) 发表:这个物质极性较小,建议增加有机相比例,此外,换柱子再试试;

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