关于氨基十二酸（一种长碳链化合物）的HPLC测定的相关问题

应助达人

得考虑是否能在色谱柱上有保留，还要考虑是否有紫外吸收。这物质是否能用液相来做，有一篇氨基十二酸合成及表征的文献，可以参看一下

那篇文章我看过，没有具体的液相测定方法，但是该文章的作者有一篇关于该物质的液相测定的专利，里面用的是C8柱，乙腈水做的流动相，但是文中提到用甲醇溶解对照品，而且溶解的量很大，我实验做下来甲醇根本不溶对照品，查资料这个物质也只是溶于乙酸，因此我对这篇专利的真实性存在一定的质疑，也有可能她用的不是UV检测器。
该化合物有羧基，应该类似于有机酸，在210nm应该会有吸收吧，另外该化合物是12个碳的链状化合物，在色谱柱上没有保留，理论上有这种可能性吗？
如果假设210nm有吸收，然后我今天用甲醇正己烷2:1的比例洗脱，只有溶剂峰，连续跑一小时，再也没有出峰，推断要么跟溶剂峰一起出峰，要么没有洗脱下来。。
然后用5%的乙腈洗脱，仍然只有一个溶剂峰，接着换了几种比例的流动相，都是只有一个峰，而且不加对照的空白溶剂和对照的图谱的溶剂峰大小一样，推断的结论仍然是要么跟溶剂峰一起出峰，要么没有洗脱下来。。
难啊。。。

刚才我又想了一下，有可能没有紫外吸收，用液相测不了，类似于硬脂酸？不过我不太了解硬脂酸 不能液相测得原因是什么？难道是没有紫外吸收？明天试一下用气相的测硬脂酸的方法

甲醇：正己烷=3:1能互溶吗？大赛璐正相柱建议使用甲醇-正己烷作为流动相时甲醇比例不要超过5%。

应助达人

链状氨基酸的紫外吸收都很小的，液相紫外一般需要衍生生色团后再检测或者在210的低波长下检测，保留时间小，用亲水柱或离子柱试试

应助达人

类似于有机酸，可以考虑尝试用磷酸盐缓冲液，调pH到3左右，210nm测定；样品溶于乙酸，因此可以用少量的乙酸溶解后用其它试剂定容

这个物质是个氨基酸，没有保留是正常的。因为你提高流动相的pH，其中的羧基就电离，降低流动相的pH，其中的氨基就会电离。电离就使样品极性增大，减小保留。
如果要增大它的保留，要么使用离子交换色谱柱，要么在流动相中添加离子对试剂，或者使用HILIC模式。
如果使用戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠之类，流动相需要调成酸性；如果使用四丁基氢氧化铵之类，流动相需要调成碱性。

聚义堂hjnytjtyjh

能互溶的，我先加正己烷，后加甲醇，一开始是分层的，后来不分层了，应该是互溶了