使用安捷伦1260-ELSD检测器测定蜂蜜中葡萄糖、果糖、蔗糖

leevane

2017/08/17

私聊

液相色谱（LC）

《GB/T 18932.22-2003》采用液相色谱示差折光检测法对蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖含量进行检测，但是由于示差折光检测器受环境温度的影响很大，检测结果的再现性不稳定，因此笔者采用液相色谱-蒸发光散射检测器进行检测，并对方法进行验证，以证明该方法的可行性。
1、ELSD原理
ELSD，蒸发光散射检测器（EvaporativeLight-scatteringDetector），是通用型检测器，可以理解为低灵敏度的质谱。它的工作原理是：样液进入检测器后，首先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室(漂移管，drifttube)，流动相及低沸点的组分被蒸发，剩下高沸点组分的小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射光被光电管接收形成电信号，电信号通过放大电路、模数转换电路、计算机成为色谱工作站的数字信号——色谱图。

2、检测方法
2.1 样品制备
对无结晶的样品，将其搅拌均匀，对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部溶化后搅匀，冷却至室温，分出0.5kg作为试样，制备好的试样置于样品瓶中，密闭，并做上标记，常温下保存。
2.2 样品处理
称取1g试样，精确至0.01g，置于50ml离心管中，加入30ml水，使试样完全溶解，等分为100份，取一份置于10ml比色管中，用水定容至刻度，过0.45μm滤膜，供液相色谱检测。

2.3 仪器条件
a) 色谱柱：Agilent Hi-Plex Ca 300*7.7mm；
b）流动相:水；
c）流速:0.6ml/min；
d）柱温：80℃；
e）ELSD参数
Nebulizer Temperature：90℃
Evaporator Temperature：50℃
Gas Flow:1.6 SLM。
f）进样量：50ul。

2.4 标准曲线绘制
用配置的果糖、葡萄糖、蔗糖标准工作液（表1）绘制标准工作曲线，保证样品中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量均在线性范围内。
表1

名称	浓度/(mg/l)
果糖	20,50,100,200,500
葡萄糖	20,50,100,200,500
蔗糖	20,40,50,100,200

3、检验方法中各参数的评价
3.1 检出限和定量限
以信噪比为10:1时对应的浓度确定为方法检出限。
以信噪比为3:1时对应的浓度确定为仪器检出限。
果糖、葡萄糖、蔗糖的方法检出限和仪器检出限见表2。
表2果糖、葡萄糖、蔗糖的方法检出限和仪器检出限

项目	仪器检出限 /(mg/kg)	方法检出限 /(mg/kg)	GB/T 18932.22中方法检出限/(mg/kg)
果糖	10	20	5000
蔗糖	5	10	2000
葡萄糖	10	15	5000

果糖、葡萄糖、蔗糖标准物质色谱图，果糖浓度为100㎎/kg，葡萄糖浓度为100㎎/kg，蔗糖浓度为40㎎/kg。

3.2标准曲线绘制
标准曲线如下图所示，ELSD检测器的标准曲线类型为幂，而不是线性。

3.3样品测定结果
样品测定结果见表3。
表3 样品中果糖、蔗糖、葡萄糖含量测定结果。

测定次数	果糖/(mg/L)	蔗糖/(mg/L)	葡萄糖/(mg/L)
1	378.0	37.4	303.2
2	377.0	37.7	312.2
平均	377.5	38.0	308.3

3.4回收率试验及精密度测定结果
回收率试验及精密度测定在方法检出限、两倍方法检出限和十倍方法检出限进行三水平试验，每个水平平行测定6次，回收率参考范围见GB/T 27404-2008结果见表4。实验室内的变异系数参考范围见GB/T 27404-2008。
表4 回收率试验及精密度试验结果

检测项目	添加水平	回收率范围%	GB/T 27404参考回收率范围%	变异系数RSD%	GB/T 27404参考RSD%
果糖	1	78.7-88.8	95-105	4.9	3.8-5.3
	2	93.3-106.8	95-105	5.1	3.8-5.3
	3	75.4-84.5	95-105	4.0	3.8-5.3
蔗糖	1	93.0-103.9	90-110	4.5	5.3-7.5
	2	106.6-114.8	90-110	2.6	5.3-7.5
	3	109.3-116.4	95-105	2.2	3.8-5.3
葡萄糖	1	72.5-82.2	95-105	4.2	3.8-5.3
	2	103.4-110.4	95-105	2.6	3.8-5.3
	3	83.8-93.2	95-105	3.6	3.8-5.3