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【求助】氨基柱正相使用不出峰了,可能原因?谢谢

  • nathanbird
    2006/12/13
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 我使用的supelco LC-NH2柱,使用正己烷和异丙醇为流动相,分离测定壬基酚类物质的同系物,之前的标线还很好,柱子也还算稳定,分离效果也不错。但昨天突然就不出峰了,而且原来可以出峰的标样也不出峰了。
    后来仔细观察,好像是出峰时间晚了很久,大约10分钟左右,所以看上去像不出峰了。
    昨天的柱子是在大约1个月没有使用后重新开始使用的,又洗了很久,而且是换相用乙腈/水洗的。洗好后,换成正相后,第一个标样出峰正常,因为是梯度洗脱,所以柱压从开始的43bar升到了200多bar,但还是重新稳定在了38bar。但之后同样的梯度洗脱程序,柱压不变化了,出的峰也越来越少。
    我是新人,请高手帮我看看,可能原因是什么?是柱子不行了吗?可我从买来到现在一共做过的样才不到二十个。还是其他什么原因?这方面有没有什么经验可以分享。
    谢谢,盼复。
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  • Easy-Boy

    第1楼2006/12/14

    柱子或其他什么地方堵塞了,换流动相冲冲。个人观点

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  • nathanbird

    第2楼2006/12/14

    先谢谢
    如果柱子堵了,那柱压为什么能稳定在38bar不变化?

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  • thj8928656

    第3楼2006/12/14

    氘灯的使用寿命快到了吧

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  • tianru的爸爸

    第4楼2006/12/14

    没有用过你这种柱子,鉴与你所说的,我提几点建议:
    1、你用了正己烷、异丙醇、乙腈和水四种溶剂,其中正己烷与后两种(乙腈和水)是不互溶的,建议你用异丙醇把柱子好好平衡过度,然后再进行梯度洗脱。
    用异丙醇时注意:异丙醇的黏度大,反压会很大的,需要用低流速来处理。
    2、如果反压到了200多bar,是否已经过了柱子的耐受?重新稳定在38bar,比之前的43少了近5bar,也不少了,再检查一下管道是否有漏夜的。

    nathanbird 发表:我使用的supelco LC-NH2柱,使用正己烷和异丙醇为流动相,分离测定壬基酚类物质的同系物,之前的标线还很好,柱子也还算稳定,分离效果也不错。但昨天突然就不出峰了,而且原来可以出峰的标样也不出峰了。
    后来仔细观察,好像是出峰时间晚了很久,大约10分钟左右,所以看上去像不出峰了。
    昨天的柱子是在大约1个月没有使用后重新开始使用的,又洗了很久,而且是换相用乙腈/水洗的。洗好后,换成正相后,第一个标样出峰正常,因为是梯度洗脱,所以柱压从开始的43bar升到了200多bar,但还是重新稳定在了38bar。但之后同样的梯度洗脱程序,柱压不变化了,出的峰也越来越少。
    我是新人,请高手帮我看看,可能原因是什么?是柱子不行了吗?可我从买来到现在一共做过的样才不到二十个。还是其他什么原因?这方面有没有什么经验可以分享。

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  • 制备液相

    第5楼2006/12/14

    个人认为是你的流动相没有平衡好柱子
    你用乙腈和水洗完以后,就直接上的流动相么?
    建议你用异丙醇把柱子用0.1ml/min流速好好冲洗,一晚上吧!

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  • nathanbird

    第6楼2006/12/15

    谢谢。
    反相和正相之间的过渡我是知道的,我之所以用反相洗是因为正相洗的时候一直没稳定。我用异丙醇过渡了,但流速没有你说的那么低,是1.0ml/min,柱压好像也没怎么高。但之前几次过渡的时候确实升高过。
    管路问题我再查查,我也觉得柱压不太对劲。
    好的,谢谢了。

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  • nathanbird

    第7楼2006/12/15

    这根柱子的柱压高限是4000psi,大约250bar左右吧,那次使用还没到那么高,大约210bar左右。
    好的,谢谢。

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