没有用过你这种柱子,鉴与你所说的,我提几点建议:
1、你用了正己烷、异丙醇、乙腈和水四种溶剂,其中正己烷与后两种(乙腈和水)是不互溶的,建议你用异丙醇把柱子好好平衡过度,然后再进行梯度洗脱。
用异丙醇时注意:异丙醇的黏度大,反压会很大的,需要用低流速来处理。
2、如果反压到了200多bar,是否已经过了柱子的耐受?重新稳定在38bar,比之前的43少了近5bar,也不少了,再检查一下管道是否有漏夜的。
nathanbird 发表:我使用的supelco LC-NH2柱,使用正己烷和异丙醇为流动相,分离测定壬基酚类物质的同系物,之前的标线还很好,柱子也还算稳定,分离效果也不错。但昨天突然就不出峰了,而且原来可以出峰的标样也不出峰了。
后来仔细观察,好像是出峰时间晚了很久,大约10分钟左右,所以看上去像不出峰了。
昨天的柱子是在大约1个月没有使用后重新开始使用的,又洗了很久,而且是换相用乙腈/水洗的。洗好后,换成正相后,第一个标样出峰正常,因为是梯度洗脱,所以柱压从开始的43bar升到了200多bar,但还是重新稳定在了38bar。但之后同样的梯度洗脱程序,柱压不变化了,出的峰也越来越少。
我是新人,请高手帮我看看,可能原因是什么?是柱子不行了吗?可我从买来到现在一共做过的样才不到二十个。还是其他什么原因?这方面有没有什么经验可以分享。