请教-流动相PH的选择

应助达人

请问你使用的方法是SEC还是CEX？

应助达人

以上总体是一个问题。与化合物的pka值有关，先去查pka值，一般流动相的PH值与pka值差2以上。采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在;对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液;分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。

应助达人

根据你的描述，推测使用方法很可能是SEC.那么SEC一般建议的磷酸盐缓冲体系pH可以在7.0附近，针对HSA和IgG也是非常合适的，你可以将pH调整至7.0试一下，拖尾因子会有所改善。此外，除了pH之外，你也可以使用以下方法改善拖尾:
1.使用NaCl增加磷酸盐的盐粒子浓度（150mM即可，不要高于200mM）。
2.流动相中加入适量Arg(精氨酸)。
3.流动相中加入不高于5%的乙腈或者异丙醇。
4.适当提高分析过程的柱温。

应助达人

依据您已有测定结果，可能需要往酸性调节，但是会有一个合适的pka范围，ph太大或太小都可能影响出峰，可以进行尝试性优化，建议先往酸性微调，另外，用的是等度条件还是梯度条件，流动相是什么，条件允许，可以适当改变有机相浓度，出峰提前一些可能对对称因子也会有帮助，还有，色谱柱的使用状况如何，如果柱效降低，也会影响拖尾因子，个人意见，供参考。

弱弱的问一句。sec和cex是什么？刚入门，不懂。??

梯度洗脱，流动相为waters的醋酸盐浓缩液，配制方法为取200ml加入2000ml的水。调酸的话是用50%的磷酸来调吗？那调碱用什么？

不知道血液制品怎么查PKA，。T?T

应助达人

SEC体积排阻色谱，CEX阳离子交换色谱

应助达人

这是生物大分子经常用的检测手段