HPLC梯度误差测试结果讨论

你一见我就笑2169

2018/09/17

私聊

液相色谱（LC）

1、事情经过：
日前，某台一起使用AB通道测试样品时，保留时间经常漂移，重现性差。改用CB通道后，发现分别将A管线放入纯水和纯乙腈中，对其压力曲线影响较大。怀疑比例阀的A路由问题，与Agilent工程师沟通之后，也得到了工程师的认可。
09.14上午更换了新的比例阀，下午通过测试样品初步判断是否正常，随机调取了多张图谱进行了比较，结果显示：压力曲线正常，重现性也较好（见附件10-图1）。
09.15根据 JJG 705-2014对仪器进行了梯度误差测试，测试结果见附件2~附件9.
09.15测试结束后，切换体系至测试样品的状态，重复进样多次。结果显示：压力曲线正常，重现性也较好（见附件10-图2），与09.14下午的压力曲线也吻合。
2、测试结果分析：
a、对AC、BC通道进行测试时，均在第二阶段（20% C）出现了异常现象，见附件4和附件6；在梯度最后又回到最初比例0%C时，响应值均未回到零位；
b、对AB、BD通道进行测试时，各个阶段的差值均偏小；
c、对AB通道进行了多次测试，结果显示：各阶段的响应值持续升高，见附件9.
3、个人问题：
a、测试过程中，首先是将AB两路放在了纯水中，CD两路放在了0.1%丙酮溶液中，分别对AC、AD、BC、BD四组进行了测试。此状态下，AC和BC在第二阶段均出现了响应值降到负值的情况，理论上讲不通；
b、AB、AD两路测试结果响应值均偏低不知何故？
c、AB两路的重现性差不知为何？
d、是否可以确定是新的比例阀有问题？还有没有其它原因？
4、说明：
附件1：以前某台仪器更换比例阀前后后的梯度误差测试结果；
附件2：09.15更换完另一台仪器比例阀后的测试结果；
附件3~附件8：各通道测试结果；
附件9：AB通道连续测试4次的结果对比——响应值持续升高，重现性差；
附件10：测试前后的重现性结果。

附件：

附件10.docx
附件9.docx
Test-CD3.pdf
Test-BD4.pdf
Test-BC3.pdf
Test-AD4.pdf
Test-AC3.pdf
Test-AB2.pdf
中控仪器更换比例阀后梯度测试原始数据（2018.09.15）.xls
更换比例阀前后梯度测试原始数据对比.xls

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BruceDoo

第1楼2018/09/17

应助达人

非常好，喜欢研究的就是好

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BruceDoo

第2楼2018/09/17

应助达人

基本上误差在1%以内，就依旧很稳定了，原先的估计是A阀开启程度不够导致

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你一见我就笑2169

第3楼2018/09/17

问题是更换了新的也有问题很是郁闷
本打算处理完这个事情参加一下原创活动呢，又顾不上了，唉~~~
BruceDoo(v3173285) 发表:基本上误差在1%以内，就依旧很稳定了，原先的估计是A阀开启程度不够导致

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夏天的雪

第4楼2018/09/18

应助达人

有没有考察泵的流量精密性，单泵测试重复性如何。
看来AB泵的梯度曲线，重复性这么差，理应样品测定时重复性应该会有问题，而您的描述和图，貌似压力和保留时间的重复性都可以的

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你一见我就笑2169

第5楼2018/09/25

实验结果确实如此，有些前后矛盾。不过，单从图谱来看：凡是涉及到C通道时，在20%的梯度阶段均有异常（见附件中AC、BC、CD测试图谱）。C通道的问题应该可以敲定了。
困惑：按道理100%的水，即初始阶段，响应值应该是最小的，诡异的是AC、BC测试的第二阶段，响应值均掉到了0以下，且梯度结束后并未回到零位。
夏天的雪(bingwang228) 发表:有没有考察泵的流量精密性，单泵测试重复性如何。
看来AB泵的梯度曲线，重复性这么差，理应样品测定时重复性应该会有问题，而您的描述和图，貌似压力和保留时间的重复性都可以的

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夏天的雪

第6楼2018/09/25

应助达人

猜测，可能就是最终并没有回到零点，所以才会引起第二阶段的响应值往下走，调到0以下，考虑管路中是否有残留
你一见我就笑2169(v2650137) 发表: 实验结果确实如此，有些前后矛盾。不过，单从图谱来看：凡是涉及到C通道时，在20%的梯度阶段均有异常（见附件中AC、BC、CD测试图谱）。C通道的问题应该可以敲定了。
困惑：按道理100%的水，即初始阶段，响应值应该是最小的，诡异的是AC、BC测试的第二阶段，响应值均掉到了0以下，且梯度结束后并未回到零位。