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困扰近一个礼拜的问题，至今未解决

m3116636

2019/04/02

液相色谱（LC）

这个帖子已经不是求不求助的问题了，因为已经困扰了快一个礼拜了，越来越难以清楚问题所在了
前备注，流动相为0.1%磷酸，乙腈，水为屈臣氏水，乙腈磷酸为Fisher 的。
两台新仪器新柱子，仪器为岛津20AT，PDA检测器，色谱柱就是岛津普通的C18柱。
走梯度，什么梯度不重要，因为该条件下都出峰……位置也大致相同。
仪器1，刚开始是一个小鼓包，后来慢慢变大了，因为什么导致变大的，目前没有找到，变成了600mv的一个大峰。在10%乙腈升到90%乙腈的时候出峰。
猜测柱子污染，用乙腈水甲醇交替冲洗，第二天峰变为300mv，后来再次交替冲洗一晚上，峰变为200mv。
更换柱子，依然有200mv的峰出现……可以排除流动相污染，下台仪器会讲。
（以上过程都未进样，进样瓶号为-1，下面相同）
仪器2，刚开始一样，小鼓包，后来进了甲基草酰氯后，后面每一针都有600mv的峰，位置峰形同仪器1，拖尾严重。同样交替冲洗了一个晚上，峰降低，峰形状不变。
1、更换一根未污染的柱子，出峰300mv，
2、那一根污染了的柱子放到未污染的仪器上，流动相同样更换了，配制方式相同，有磷酸的，出峰175mv。（这里我猜测是柱子有污染，可能来源于仪器）
3、未污染的柱子放到未污染的仪器，用同样的流动相，无峰（这里我认为的是，流动相没问题！）
接下来脑壳痛了……
4、打了800，更换流动相，不加磷酸，只用水和乙腈，不进样走梯度……这回比较戏剧了，出峰变成了1500mv又宽又胖。
5、再更换了一根柱子，同样的不加磷酸，只用水和乙腈，不进样走梯度……出峰同样1500mv。
6、把有污染的柱子接回原来污染的仪器，走样品，流动相为0.1%TFA，乙腈，梯度类似，无如此高的杂峰出现……
到这里，我就已经凌乱了，思路也乱七八糟的，菜鸟已经解决不了了，报修了……等待工程师的上门排查。
有没有遇到过类似的问题，猜测一下可能原因呀- -
————————————————这是第二天的分割线————————————
前一天用异丙醇接的是C流路冲了一晚上，还是接柱子的，结果是，第二天没有任何变化，让人百思不得其解。
工程师把A流路一起放到B流动相（乙腈）运行走基线，发现，基线漂移，此时发现A流路有污染，而且较为严重，大约冲了两个小时以后，-1走梯度，出峰200，证明冲洗效果有的说明是A流路污染。
把AB放到乙腈设置了一个15min的运行时间，100%乙腈的，买了不同的水拿过来进了几针样，都有小峰，且位置大致类似，说明不是水的问题。再把进样A流动相用的0.1%磷酸水溶液进了10ul，其余峰类似，在3min多多出了一个20mv左右的峰，工程师认为就是那个杂质。
那么问题就来了，三台仪器，流动相都是一样的配比方式，怎么这两台就有如此大的污染？？难道是磷酸？？？
好了接下来继续，把A泵放到买的怡宝水中，B泵仍为乙腈，-1走梯度，出峰跟用磷酸水是一样的，大小一样……
那么猜测进样器，把进样器的管路拆下，直接由泵进入流路进入色谱柱，-1走梯度，峰大小一样
拆下污染的色谱柱，更换其他的色谱柱，同样-1走梯度，峰变小位置一样（好了，证明色谱柱确实有污染，但是很大部分是流路中带入的）
那么到底是哪里会带入呢？？询问工程师，可不可能进样器进了高浓度样品后带入了泵，工程师回答，样品是不经过泵头的，从进样器过来后直接流入色谱柱……
再问，会不会是检测器流通池污染了，回答，如果是流通池污染，那么基线就会走不平，毛刺严重，而我们基线正常……
此时此刻已经在风中凌乱了……工程师只告诉我，既然冲A有效，那么就先冲吧……而且说，在仪器中残留的可能性不大，依然怀疑流动相问题……我承认这么一圈排除下来，确实这个问题最大，但是之前已经说了，三台仪器用的同样的流动相，只是第三台是老的安捷伦，这两台是新的岛津……其余没有明显不同……
再者，之前也尝试了，用怡宝水和乙腈照常出峰……那么真的是流动相的问题吗……
而且冲A流路有效，冲其余流路无效，且用其余流路走样品是没有杂质峰的，而这里用的乙腈是一样的，所以，真的也跟乙腈有关系吗- -……
总结，一天下来，没有找到具体污染原因，唯一能确认的就是A 的流路污染严重，用乙腈冲洗有效果，所以最后工程师做出的决定是，先冲吧……………………
但是非常失望，因为没能找出真正的污染原因，而且能排查的都排查了，接下来就只有用时间来排查了。。。
————————————————N天后分割线——————————————
折腾了很多天，能冲的都冲了，那个1500mv的杂峰降低了到了15mv左右，而且再无法降低，还多了多了很多其余杂峰，无论如何冲不出去，不知是不是柱子已废……………………
现在空白的图已经发楼下了……

分
该帖子已被版主-夏天的雪加2积分，加2经验;加分理由:鼓励发帖

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检测老菜鸟

第1楼2019/04/02

应助达人

哈哈，有可能柱子污染有一部分，进样针以及检测器流通池应该也多关注一下。期待工程师过来的反馈。

0

m3116636

第2楼2019/04/02

猜测进样针污染的可能性较大，但是，每次进样都洗针，残留这么大实在是难以想象- -，异丙醇过夜，明天就看工程师的了
检测老菜鸟(v3295053) 发表:哈哈，有可能柱子污染有一部分，进样针以及检测器流通池应该也多关注一下。期待工程师过来的反馈。

0

夏天的雪

第3楼2019/04/02

应助达人

欢迎反馈，如果乙腈和水做流动相也出很大的峰，很可能是被污染了，貌似这种物质对仪器的污染还很大

0

m3116636

第4楼2019/04/03

非常大，1500mv的峰，冲一天降为750— ——
夏天的雪(bingwang228) 发表:欢迎反馈，如果乙腈和水做流动相也出很大的峰，很可能是被污染了，貌似这种物质对仪器的污染还很大

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有水有渝

第5楼2019/04/07

应助达人

楼主能把色谱图发上来看一下吗，另外有没有把色谱柱换成两通，可以排除色谱色谱污染的干扰，另外梯度变化速率还是有影响的，岛津20a二元泵，以前就发现梯度有鬼峰，N年都无法解决。
参看老帖子：https://bbs.instrument.com.cn/topic/2106982
说不定这是个硬伤，有这款仪器的版友，都可以做一下大比例变化的梯度看看

0

dadgoh

第6楼2019/04/08

应助达人

看一下污染状况的谱图。

0

m3116636

第7楼2019/04/08

异丙醇冲洗，乙腈冲洗，更换流动相一系列都做了，把残留出峰降低至了15mv！再也下不去了。
现在用这两根色谱柱空白中出峰很多，无法冲干净了，不知知道是不是柱子快报废……
乙腈冲洗两天，柱子的残留稳固在10几mv的峰再也下不去，且杂峰众多！！还有什么办法可以冲洗干净了……
黔驴技穷！
以下附上折腾了一个多礼拜后的两根柱子两个仪器空白峰图：
BLANK-LC01
BLANK-LC02

0

m3116636

第8楼2019/04/08

图已发，如果单单是梯度问题，那也就不是大问题了，问题并不是梯度
有水有渝(xky0230699) 发表:楼主能把色谱图发上来看一下吗，另外有没有把色谱柱换成两通，可以排除色谱色谱污染的干扰，另外梯度变化速率还是有影响的，岛津20a二元泵，以前就发现梯度有鬼峰，N年都无法解决。
参看老帖子：https://bbs.instrument.com.cn/topic/2106982
说不定这是个硬伤，有这款仪器的版友，都可以做一下大比例变化的梯度看看

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m3116636

第9楼2019/04/08

已发冲洗几天以后的图！已经改善良多，但杂峰众多，无法冲出
dadgoh(dadgoh) 发表:看一下污染状况的谱图。

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Insm_8f1c4a3a

第10楼2019/04/08

有没有一种可能，配置的流动相被样品污染了，导致整个系统都覆盖杂质，只有高比例有利相才能冲洗出一部分。无论你换什么色谱柱甚至不接色谱柱，都有这种杂质峰。

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