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2,4-二硝基氯苯做氨基酸的柱前衍生遇到的一些问题
wqcylsg
2019/06/27
私聊
液相色谱(LC)
目前本人在做一个培养基中氨基亚砜蛋氨酸(MSX)的检测,考虑到氨基酸类在
液相
中吸收弱,想到了柱前衍生,查了一些资料用了2,4-二硝基氯苯(CDNB)。
实验条件:1mL 1 mg/mL 的MSX+1 mL Na2CO3 (pH=9.0, 1%)+227 uL 30mg/mL CDNB,85℃暗处反应1h,冷却+0.5 mL 0.1mol/L HCl, 加水定容至10mL,UPLC进样。
色谱条件:
色谱柱:Waters ACQUITY UPLC Peptide BEH C18
吸收波长:360 nm,
流动相:70% NaAC-HAC, 30% ACN
流速:0.2 mL/min
现在出现的问题是:20 min内出的较为明显的峰是CDNB的峰,没有经CDNB衍生后的新的峰出现
我想请教做过类似柱前衍生实验的前辈,是我这个衍生过程有哪里不完善吗?还是色谱条件不对?但这种方法已经很成熟了,文献报道也很多了。还是这个氨基亚砜蛋氨酸不容易被衍生化?
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麻烦各位老师帮我看一下这个图有什么问题吗?
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hujiangtao
第1楼
2019/06/27
应助达人
这方面的文献挺多的 楼主可以多参考几篇看看
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