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高效液相色谱法测定化妆品中盐酸美满霉素等7种抗生素组分含量

不忘初心

2019/07/01
谱绘人生

私聊

液相色谱（LC）

1. 摘要
7 种常见抗生素（盐酸米诺环素、盐酸土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸多西环素、氯霉素及甲硝唑）是化妆品安全技术规范2015版要求禁用成分，然而市场抽检经常会有产品检出。如何快速准确测定化妆品中的抗生素含量很有必要，本文通过溶剂超声波提取，滤膜过滤，用高效液相色谱仪测定化妆品中7种抗生素的含量，方法线性良好，检出限低，方法准确度和精密度很好，完全满足实验室快速准确测试要求，值得推荐。
关键词：抗生素，超声提取，高效液相色谱法
2.实验部分
2.1 试剂及仪器
色谱纯甲醇，优级纯盐酸，电子天平，超声波清洗机，高效液相色谱仪（沃特世e2695）

2.2 测试过程
称取1g化妆品类试样到10mL具塞比色管中，加入甲醇和0.1M盐酸的1+1混合溶液到刻度，超声提取30分钟，经0.45μm滤膜过滤后在高效液相色谱仪(HPLC)上进行分析。
2.3 仪器条件
结合实验室实际情况，确定仪器条件如下：

色谱柱	C18柱，250mm×4.6mm×5μm
进样量	20μL
流速	0.9mL/min
流动相	A:0.01mol/L草酸溶液(磷酸调节pH至2.0) B:甲醇 C:乙腈 A:B:C=69:11:20
柱温箱	30°C
波长	268nm
采集时间	22min

此色谱条件下，标准溶液(1mg/L)色谱峰如下：
由图上可知，此色谱条件下各组分分离良好，基线稳定，适合分析。
2.4 线性范围
按标准要求，使用购买的盐酸美满霉素类标准物质配制成1000mg/l混合储备液，再通过逐级稀释用流动相配制成0.5, 1, 2,5及10mg/L的标准曲线工作溶液，在HPLC上进行分析，得到数据如下：

	各浓度峰面积
浓度mg/L 目标物	0.5	1	2	5	10	相关系数(R)
盐酸美满霉素	19209	35658	86798	210697	425803	0.9998
甲硝唑	14665	28052	61921	139379	283241	0.9997
二水土霉素	26207	52125	107468	265766	540079	0.9999
盐酸四环素	19744	39705	82312	204106	413922	0.9999
盐酸金霉素	10137	20219	43603	113420	237213	0.9998
盐酸多西环素	9833	20726	47460	118973	249209	0.9998
氯霉素	13869	30459	67009	168390	347240	0.9999

从上表可以看出，曲线线性良好，相关系数R＞0.995，满足标准要求。
2.5 精密度
取1mg/L的混合标准溶液，在HPLC上进行7次测试，计算精密度。

浓度mg/L 目标物	1	2	3	4	5	6	7	RSD
盐酸美满霉素	0.912	0.964	0.956	0.946	0.990	0.972	0.931	2.7%
甲硝唑	0.920	0.930	0.921	0.924	0.925	0.925	0.925	0.4%
二水土霉素	0.990	0.976	0.977	0.983	0.985	0.979	0.982	0.5%
盐酸四环素	0.973	0.958	0.946	0.968	0.966	0.962	0.963	0.9%
盐酸金霉素	0.965	0.939	0.941	0.945	0.929	0.926	0.920	1.6%
盐酸多西环素	1.007	0.967	0.942	1.040	1.017	1.015	0.982	3.4%
氯霉素	0.915	0.954	0.964	0.936	0.935	0.916	0.914	2.1%

7次测试相对标准偏差RSD均小于5%，精密度良好。
2.6 样品加标回收率
选取两种化妆品，保湿乳和防晒乳样品，分别添加0.1mL的1000mg/L盐酸美满霉素混合标准溶液，样品中理论加标浓度为10mg/L，按样品测试过程进行操作，重复3次，考察样品加标回收率。

保湿乳加标	测得浓度mg/L				回收率
	样品	加标-1	加标-2	加标-3	加标-1	加标-2	加标-3
盐酸美满霉素	ND	9.24	9.17	9.22	92.4%	91.7%	92.2%
甲硝唑	4.48	12.69	12.85	12.52	94.4%	96.0%	92.7%
二水土霉素	ND	10.55	10.50	10.29	105.5%	105.0%	102.9%
盐酸四环素	ND	9.04	9.14	8.89	90.4%	91.4%	88.9%
盐酸金霉素	ND	8.88	8.85	8.99	88.8%	88.5%	89.9%
盐酸多西环素	ND	22.56	22.81	22.88	104.6%	107.1%	107.7%
氯霉素	ND	9.81	9.61	9.73	98.1%	96.1%	97.3%

防晒乳加标	测得浓度mg/L				回收率
	样品	加标-1	加标-2	加标-3	加标-1	加标-2	加标-3
盐酸美满霉素	ND	8.89	8.81	8.85	88.9%	88.1%	88.5%
甲硝唑	3.25	12.04	12.63	12.34	94.5%	100.4%	97.5%
二水土霉素	ND	10.09	10.46	10.21	100.9%	104.6%	102.1%
盐酸四环素	ND	8.73	9.20	8.80	87.3%	92.0%	88.0%
盐酸金霉素	ND	8.60	9.31	8.88	86.0%	93.1%	88.8%
盐酸多西环素	12.10	22.17	22.57	22.70	100.7%	104.7%	106.0%
氯霉素	ND	9.81	9.61	9.45	98.1%	96.1%	94.5%

回收率要求80%-120%.
分别进行3次测试，回收率都在85%~110%之间，满足测试要求。
2.7 方法检出限(MDL)和定量检出限(LOQ)
在10mL比色管中添加0.1mL的50mg/l盐酸美满霉素混合标准溶液，按样品处理过程进行处理，重复7次，样品中理论加标浓度为0.5mg/L，通过标准偏差来计算检出限。

	1	2	3	4	5	6	7	SD	MDL (mg/L)	LOQ (mg/L)	LOQ (mg/kg)
盐酸美满霉素	0.513	0.515	0.511	0.517	0.514	0.513	0.510	0.002	0.007	0.024	0.2
甲硝唑	0.466	0.467	0.467	0.470	0.486	0.469	0.469	0.007	0.021	0.069	0.7
二水土霉素	0.518	0.538	0.517	0.517	0.522	0.522	0.511	0.008	0.025	0.085	0.8
盐酸四环素	0.505	0.531	0.513	0.509	0.529	0.507	0.504	0.011	0.034	0.113	1.1
盐酸金霉素	0.440	0.468	0.463	0.479	0.532	0.469	0.448	0.030	0.090	0.299	3.0
盐酸多西环素	0.531	0.543	0.510	0.533	0.546	0.495	0.494	0.022	0.066	0.219	2.2
氯霉素	0.490	0.480	0.493	0.502	0.452	0.510	0.460	0.021	0.064	0.213	2.1

以7次加标测试值相对偏差的3倍作为方法检出限，10倍作为定量检出限，按称样量1g，最终定容体积10mL，计算得到的定量检出限为0.2~3.0mg/kg，而化妆品安全技术规范2.2中盐酸美满霉素等组分的定量限为：
通过对比可知，实验室的实际定量检出限能够标准方法的定量限要求，可按照此方法开展测试。
2.8 结果与讨论
本文通过试验考察了线性相关系数、精密度、回收率及检出限等参数，结果表明：线性良好，达到0.999以上，精密度在0.4%~3.4%，回收率在88%~108%之间，检出限在0.2~3.0mg/kg，均满足测试要求，实验室可以依据此方法开展化妆品中盐酸美满霉素等7组分含量的测定工作。
3. 参考文献
【1】化妆品安全技术规范2015版
【2】 GB/T27417-2017 合格评定化学分析方法确认和验证指南
【3】 CNAS-CL01-A002:2018检测和校准实验室能力认可准则在化学检测领域的应用说明

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