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关于新药方法开发

你一见我就笑2169

2019/07/12

液相色谱（LC）

研发过程中经常会遇到方法开发，本人最近遇到一个问题：方法验证的结果良好，可以通过。但是通过对计算公式的分析，发现：该方法误差较大。
测试过程：两份对照（Std1重复5针，Std2重复2针），样品平行配置两份，各进一针。通过外标计算。
样品配制过程呢：取25.0mg样品稀释至100ml，移取10.0ml稀释至50ml流动相，进样量10微升。
数据基本信息：Std峰面积在1600左右，通过比较重复五针Std1的数据发现，其中保留时间极差为0.04min，峰面积的极差为24，RSD为0.5%。
分析过程：
以某个样品计算公式为基础，通过改变计算公式里的各参数来考察其对结果的影响大小：
1、称样量±0.1mg，含量结果±0.4%；鉴于自己所用天平为小数点后五位，此因素影响较小；且此误差可通过增大称样量进一步减小。
2、峰面积±10，含量结果±0.6%；鉴于Std1重复进样五针里，峰面积极差为24，初步判断误差主要来源于此。
3、100ml容量瓶的误差±0.1ml，含量结果±0.12%，影响较小。
个人判断：峰面积的影响最大。
但是五针的RSD仅为0.5%，符合要求。
烦请问一下：HPLC外标法测定含量时，如何选择合适的参数，才能尽量减小误差？上述例子中，是何原因引起峰面积对结果的影响如此大呢？是不是配样过程或其它条件设置过程中，哪里不合理？

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hujiangtao

第1楼2019/07/12

应助达人

RSD值不大呀

0

有水有渝

第2楼2019/07/13

应助达人

Std1重复5针只跟色谱条件有关，跟配制过程和参数设置都没有关系，属于正常的允许波动范围

0

牛一牛

第3楼2019/07/14

应助达人

如果你连续5针的峰面积RSD为0.5%说明你仪器本身没问题，如果你方法验证也是好的，那说明方法也没问题，如果测含量结果偏差大，唯一的可能就是操作问题，测含量对操作是一个很大的考验。
你如果想找一下是否是自己操作问题，你可以用5针的对照标2针对照的回收率，用配制两份样品的第一份标第二份的回收率，然后会真相大白的。

1

你一见我就笑2169

第4楼2019/07/15

这个我平时做样时会计算第二个标相对于第一个的回收率在99%~101% 应该还OK吧？
我可能没有表达清楚：1、重复五针峰面积的RSD确实不大，从这个角度考虑可以接受。但是最大面积和最小面积的极差为24，而峰面积对我的结果影响很大。峰面积变化10个单位，含量结果的变化为0.6%，峰面积变化24，我的结果变化在1.5%左右，从这个角度考虑，又不能接受。
2、我的主要困惑是：是什么原因引起峰面积对结果有如此大的影响呢？有没有通过改变某些参数，来降低其影响以尽可能减小误差？
牛一牛(v2700892) 发表:如果你连续5针的峰面积RSD为0.5%说明你仪器本身没问题，如果你方法验证也是好的，那说明方法也没问题，如果测含量结果偏差大，唯一的可能就是操作问题，测含量对操作是一个很大的考验。
你如果想找一下是否是自己操作问题，你可以用5针的对照标2针对照的回收率，用配制两份样品的第一份标第二份的回收率，然后会真相大白的。

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你一见我就笑2169

第5楼2019/07/15

我可能没有表达清楚，我的困惑是：为何峰面积对其结果的影响如此之大？有没有通过改变其它参数来减小峰面积对结果的影响？
有水有渝(xky0230699) 发表:Std1重复5针只跟色谱条件有关，跟配制过程和参数设置都没有关系，属于正常的允许波动范围

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牛一牛

第6楼2019/07/15

应助达人

你对照品溶液配制过程可以先说一下
你一见我就笑2169(v2650137) 发表: 这个我平时做样时会计算第二个标相对于第一个的回收率在99%~101% 应该还OK吧？
我可能没有表达清楚：1、重复五针峰面积的RSD确实不大，从这个角度考虑可以接受。但是最大面积和最小面积的极差为24，而峰面积对我的结果影响很大。峰面积变化10个单位，含量结果的变化为0.6%，峰面积变化24，我的结果变化在1.5%左右，从这个角度考虑，又不能接受。
2、我的主要困惑是：是什么原因引起峰面积对结果有如此大的影响呢？有没有通过改变某些参数，来降低其影响以尽可能减小误差？

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有水有渝

第7楼2019/07/16

应助达人

峰面积本来就是参与计算的基础参数，其变化直接影响结果，无法通过修改参数解决，只能通过提高仪器性能，买更好的仪器。你的数据已经很好了
你一见我就笑2169(v2650137) 发表: 我可能没有表达清楚，我的困惑是：为何峰面积对其结果的影响如此之大？有没有通过改变其它参数来减小峰面积对结果的影响？

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lunanjituan

第8楼2019/07/16

你可以提高样品浓度，峰面积会随之增大，这样峰面积变化对含量的影响可能会变小很多，含量测定峰面积在4000-8000左右较好

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你一见我就笑2169

第9楼2019/07/17

配置过程和样品一致只是一个用的对照品一个用的样品
牛一牛(v2700892) 发表: 你对照品溶液配制过程可以先说一下

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你一见我就笑2169

第10楼2019/07/17

以前做药典其它方法，自己也通过计算公式考察过各参数的影响但是面积的影响不会很大都可以接受。因为这个方法是自己开发的，经验不多。所以就在想是不是因为方法设定过程中某些参数不合理导致的？
有水有渝(xky0230699) 发表: 峰面积本来就是参与计算的基础参数，其变化直接影响结果，无法通过修改参数解决，只能通过提高仪器性能，买更好的仪器。你的数据已经很好了

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