[仪器说]说说使用分光光度计的那些事

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2019/09/02
鹤壁农检联合队

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说说使用分光光度计的那些事
4月23日上午，我用GB7467-87二苯碳酰二肼分光光度法测定水质六价铬，绘制校准曲线时，出现了系列浓度点测定的数值准确性和重现性极差，同一容量瓶三次测量值最多相差18个点的飘移情况，最后导致相关系数达不到要求，校准曲线不合格不能使用，测定不能进行。
上午测定情况如下：

浓度点	0.00	0.20	0.50	1.00	2.00	4.00	6.00	8.00	10.0
第一次测定值	0.003	0.005	0.016	0.027	0.049	0.080	0.114	0.131	0.177
第二次测定值	0.005	0.008	0.019	0.025	0.053	0.087	0.124	0.141	0.183
第三次测定值	0.002	0.009	0.018	0.020	0.051	0.078	0.109	0.149	0.176
测定平均值	0.003	0.007	0.017	0.024	0.051	0.082	0.116	0.140	0.179
校准曲线	y=0.0172x+0.0081，相关系数r=0.996
判定	吸光度值重现性差，相关系数不符合要求，校准曲线不合格，不能使用。

下午，在清洗了比色皿，提高了比色皿清洁度和正确使用方法情况下，同方法同上午处理步骤再次绘制校准曲线，测定情况如下：

浓度点	0.00	0.20	0.50	1.00	2.00	4.00	6.00	8.00	10.0
第一次测定值	0.000	0.005	0.016	0.025	0.042	0.078	0.113	0.149	0.184
第二次测定值	0.000	0.006	0.016	0.025	0.043	0.078	0.113	0.149	0.185
第三次测定值	0.000	0.006	0.016	0.025	0.043	0.079	0.113	0.149	0.184
测定平均值	0.000	0.006	0.016	0.025	0.043	0.078	0.113	0.149	0.184
校准曲线	y=0.0181x+0.0046，相关系数r=0.9993
判定	准确性和重现性好，相关系数符合要求，校准曲线合格

查找影响两次试验结果的原因：近一段时间，环评参数测定量大，紫外可见分光光度计使用频繁，比色皿污染严重。
结论：比色皿清洁是否是影响测定准确性和重现性的因素之一。
无独有偶，4月29日我用GB7467-87二苯碳酰二肼分光光度法测定单位的UV-1700紫外可见分光光度计的检出限时，测定的检出限大于方法规定的最低检出浓度，查找出造成空白值和标准偏差高的其中两个原因①比色皿清洁度和使用方法不符合要求；②检测时间过长都与比色皿的使用有着直接和间接的关系。
为了减少实验和分析误差，提高比色皿的使用寿命，通过多次试验总结，比色皿使用宝典正式出炉。
一、比色皿的选择
正确使用比色皿，在紫外区一定要用石英比色皿，不能使用玻璃比色皿。
二、比色皿的正确使用方法
1、在使用比色皿时，两个透光面要完全平行，比色皿一定要垂直置于池架中，以保证在测量时入射光垂直于透光面，要卡紧池架或池，防止池架或池晃动。
2、处理大量液体样品时，一定要防止液体样品溅出，如果溅出的样品残留在样品室中，蒸发后的气体会充满整个样品室，腐蚀样品室内壁，导致检测结果不准确。
3、使用挥发性溶液时应加盖。
4、凡含有腐蚀玻璃的物质的溶液，不得长期盛放在比色皿中。不能将比色皿放在火焰或电炉上进行加热或干燥箱内烘干。
5、比色皿必须保持清洁和无伤痕，不得将比色皿的透光面与硬物或脏物接触。
6、拿取比色皿，只能接触两侧毛玻璃，避免接触光学面，轻拿轻放
7、盛装溶液时，高度为比色皿的2/3处，倾注溶液要小心，不要弄湿外壁，减少擦拭次数，降低因擦拭带来的误差。光学面如有残液可先用滤纸轻轻吸附，然后再用镜头纸或丝绸由上而下擦拭干净。
8、倾倒比色皿中的液体，应沿着比色皿的一个角顺着毛面倾斜倒入废液瓶。
9、在测定或换测其他样品时，应用待测溶液冲洗比色皿3-4次。倾注溶液时不要产生气泡，如有气泡，重换溶液。
10、测定一系列溶液时，按浓度由低到高的顺序测定，减少测量误差。
11、比色皿要配套按方向使用，比色皿换向后测量误差可达4%-7%左右，测量时看准箭头标志。如无标志，配套鉴定后按方向在毛玻璃上端做上箭头一致的标记，避免操作时搞反。
三、比色皿的正确清洗方法
如果比色皿污染不太严重，先用脱脂棉签蘸上无水乙醇轻轻擦拭几次，再用纯水冲洗干净即可。
如果比色皿污染严重，可以采取以下两种方法。
①先将比色皿侵入含有少量阴离子表面活性剂的碳酸钠(20克/升)溶液泡洗，经水冲洗后，再于过氧化氢和硝酸(5：1)混合溶液中侵泡半小时。
②在通风橱中用盐酸、水、甲醇（1:3:4）混合溶液泡洗，一般不超过10分钟。
比色皿不能用碱液洗涤，也不能用硬布、毛刷刷洗
四、比色皿的保存方法
使用后用纯水冲洗干净，晾干防尘保存。
小结
在光度法中，比色皿的选择、使用和维护对分析结果的准确性和重现性，特别是在信号水平较低（仪器噪音影响较大，）即低浓度或空白样品测量时，比色皿的正确使用尤为重要。