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液相不出目标峰，梯度条件摸索

Insp_494cf49a

2020/07/05

液相色谱（LC）

我做的是样品中的黄酮定性定量，试了许多文献的方法，只有芦丁出峰，但按理说应该还有槲皮素、山奈酚等等，一个是因为其他品种的样品有，另一个是总黄酮含量大小和芦丁含量大小不一致。

在我尝试了浓缩、纯化、酸水解都不行之后，我开始摸索液相条件

我看了社区的一些精华帖，选定了0-48min，5%-95%乙腈（另一个是1%乙酸），打算先测一下进样体积和流速的影响，结果发现在这个梯度下，无论怎么换别的，只有两分钟左右的溶剂峰，其余一个峰都没有。

所以，我觉得可能得用分段的梯度，但是这个分段怎么分，每一段的流动相占比我不知道该怎么设置，于是就胡乱设置了一下。

比如48min平分成六段，一段8分钟，让乙腈从5%开始往上升，升到100%，再走一个初始比例。

我想问的是：

1. 我上面的思路是对的吗？

2. 大家知道梯度怎么分段设置吗？

3. 有的方法混标跑的很好，槲皮素那些都能出峰，但是样品就是不出槲皮素的峰，这是不是说明我样品里就是没有这些东西？

4. 我现在尝试分析别人的梯度，比如他们的槲皮素8分钟出峰，而梯度是0-10min，30-40%乙腈，这能不能说明，（40-30）/10*8+30=38，38%的乙腈可以洗脱槲皮素，我应该用38%左右的乙腈多走一会？

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xiaogumd11

第1楼2020/07/06

应助达人

先用100%的乙腈走30-40分钟，看看芦丁槲皮素、山奈酚等等出峰时间，再根据出峰时间，调整梯度淋洗。方法二，参考相同色谱柱，相同分析条件，确定出峰大致时间范围，再调整梯度淋洗，达到最优条件

0

我是风儿

第2楼2020/07/06

应助达人

请问你们的具体样品是什么？

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慢生活

第3楼2020/07/06

第一，确定样品中有这个东西，且溶于流动相。
第二，确定波长是否正确。
第三，用高比例有机相走单个物质以确定位置范围。如果在一定时间范围内未出峰，可尝试增大有机相比例和流速。
第四，确定出峰后，可在出峰前10min进行梯度洗脱。优化梯度洗脱方法。

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lijing320323

第4楼2020/07/06

调节流动相

0

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