在样品前处理前加入内标，内标会损失，那如何定量呢？

应助达人

各位老师，大家好，我是做环境样品中抗生素检测（用LC-MS/MS）的，看了许多文献，都是在样品前处理（过萃取柱）前加入了内标，之后定容的时候（上样前）就没在说过加内标的事情了，所以我产生了几个疑问：

1.这样的话不就是把内标当作了回收率指示物了嘛？
目标物会损失，内标物也会损失，前处理前加内标是为了校正整个前处理过程目标物的损失。也可以像您说的内标顺带作回收率指示物（如果内标加入浓度和上机测试浓度都知道的话。）
2.内标物在前处理加的话，处理过后会有损失，内标物就不准了，也就无法知道内标物浓度，如何定量？
内标物上机可以测量浓度。
3.有些文章做的标准曲线是 纵坐标为峰面积比，横坐标为物质浓度，而不是浓度比，就是通过加内标样中样品峰面积和内标峰面积比来定量，这样真的能定量嘛？
这个没问题的，两者是成正比的。
我也才开始学习这些，可能有些地方表述不太清，希望各位老师能帮忙解答一下，感谢各位！

同最近也在被内标烦恼，搞不懂，我老师告诉我的大概意思就是记住萃取时候加入的内标用量，然后等检测出来以后根据峰面积算出内标的量，跟加入的量相比损失了多少，然后用损失比计算实际样品待测物质的浓度??????不知道内标法是不是这个作用？太难了

应助达人

内标加在前处理前的不多，基本上都是加在上机前。如果是在前处理前加的内标肯定是有损失的.，这个不用怀疑，这样加可以将内标物当成替代物，用来计算加标回收率来确定损失。但是到定量这块涉及到损失折算，这就要求内标物的损失和目标物的损失要在同一个方向上（同比例增加或者同比例减少），不然就会测定有误。

应助达人

各位老师，大家好，我是做环境样品中抗生素检测（用LC-MS/MS）的，看了许多文献，都是在样品前处理（过萃取柱）前加入了内标，之后定容的时候（上样前）就没在说过加内标的事情了，所以我产生了几个疑问：
1.这样的话不就是把内标当作了回收率指示物了嘛？
相当于是。

2.内标物在前处理加的话，处理过后会有损失，内标物就不准了，也就无法知道内标物浓度，如何定量？
内标物浓度以未损失的计算，前提是假设和目标物损失一致。

3.有些文章做的标准曲线是 纵坐标为峰面积比，横坐标为物质浓度，而不是浓度比，就是通过加内标样中样品峰面积和内标峰面积比来定量，这样真的能定量嘛？
峰面积就是浓度值，可以定量。

应助达人

液质首选和目标物性质最为相似的同位素内标，在前处理过程中理论上与目标物损失是同步的，是用来校正回收率和基质效应的首选方式。具体原理可查阅下面文献

应助达人

内标同样进行前处理，有效减少损失，得出更精确的结果

很多标准把内标和替代物当作一回事了，在前处理加入的起到的作用是替代物的作用，但是因为标准是以内标法定量，所以还是称内标。因为液质基质效应，一般采用内标法，模拟基质效应或者前处理损失，计算出来的结果才是真实的。

回收率计算啊

首先要明白什么化合物能做内标，一个是化学性质和目标化合物化学性质相近，对目标化合物没干扰。所以前处理前加入内标物的话，前处理过程内标的损失或者基质的干扰对内标和目标化合物是一致的，所以可以根据前处理加入已知浓度的内标和标准溶液内标峰面积的比，这个比值理论上应该和样品目标化合物与标准溶液里面的目标化合物峰面积比值一直，然后前面的内标比值乘以标准溶液浓度即可。这样可以起到消除基质干扰和过程损失。