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【实战宝典】双泵运行乙腈和水流动相，产生基线波动的原因有哪些？

小官人

2021/03/22

液相色谱（LC）

问题描述：做三七，检测波长为203nm，用双泵跑乙腈和水，梯度洗脱，基线上下大幅波动；只运行一只泵基线就很稳定，用双泵跑一种流动相基线也很稳定。仪器为双泵高压梯度，没有在线脱气机，是什么原因导致的这种情况？

解答：乙腈以将近20%的比例直接在线与水混合，很容易产生大量微小气泡，导致基线不稳。这种情况是由于微小的气泡造成的，常发生在性能不是很好的仪器配置（如没有在线脱气装置的高压梯度系统）。因此，在HPLC中在线脱气装置还是十分必要的，如果没有的话也可以试着通过以下方式解决：

（1）彻底脱气，单纯超声波处理并非是很好的脱气手段，应该在超声的同时施以负压，例如用水冲泵来抽真空。

（2）可以尝试将乙腈与水以适当的比例（例如10%~15%）预混，然后脱气当流动相A，再以乙腈为B进行梯度分离，当然梯度表要做适当调整以便保证流动相中乙腈的总浓度相当于以前。

（3）在检测器之后连接一段较细的管子，以便增加背压，这样可以抑制气泡在检测器流通池之前释放出来。

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blueseayzf

第1楼2023/06/16

我的乙腈与水是24:76，双泵时时间飘，混合在一起超声后还是会看到管线里有气泡，排完后一会又有气泡。

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