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【实战宝典】液相色谱测定合成色素不出峰的原因有哪些?
小官人
2021/03/23
私聊
液相色谱(LC)
问题描述:
国标里测定合成色素的波长为
254nm
,流动相用的醋酸铵和甲醇,醋酸铵的
pH
值为
4.0
,按照该条件为什么检测不到色谱峰?
解答:
(
1
)
液相色谱
检测色素的仪器条件可以参考
GB 5009.35-2016
《食品安全国家标准
食品中合成着色剂的测定》,以甲醇和
0.02mol/L
乙酸铵溶液为流动相,通过紫外检测器或二极管阵列检测器检测。标准中未提及调节流动相酸性,而已作废的
GB 5009.35- 2003
版本中将流动相
pH
值调至
4.0
;实际检测过程中发现,当流动相
pH=4
时,色素不出峰。
(
2
)从日落黄等色素分子结构来看,酸性环境中大多数呈分子状态,在反相
C
18
色谱柱上更倾向于保留,甲醇等有机相比例不够的话不容易将其从色谱柱上洗脱,可能会出现不出峰现象。同时
254nm
是
液相色谱
紫外检测器通用波长,这些色素在该波长处有吸收,但并不是其最大吸收波长(如日落黄最大吸收波长为
483nm
、柠檬黄为
427nm
等),若紫外检测器氘灯使用时间较长能量下降的话,有可能导致色素在
254nm
处吸收值较低影响目标物出峰。
(
3
)综上所述,解决该问题可以试着从两方面入手:一是流动相用甲醇和
0.02mol/L
乙酸铵(不调
pH
值,查阅很多文献用的也是这种流动相组成),梯度洗脱程序可以参照
GB 5009.35-2016
;二是使用二极管阵列检测检测器,可以不用考虑最大吸收波长问题,若没有可以查阅资料找到各种色素对应的最大吸收波长,然后再根据自己需要检测的组分确定更合适的波长。
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