顺铂的细胞毒性实验及细胞形态学观察
（1）当H1299细胞融合到80%-90 %左右，消化处理细胞并计数。将H1299细胞以105个/孔的比例接种到96孔板中，保证细胞分布均匀，培养过夜使细胞贴壁。
（2）分别配置0、1、10、100、1000 μM的含顺铂培养基，沿着侧壁加入到96孔板中，每孔200 μL，每个浓度设置6个复孔。96孔板外围加入100 μL PBS缓冲液，防止边缘效应。
（3）将96孔板放入培养箱培养3天后，用倒置相差显微镜观察细胞形态并拍照。
（4）用MTS法测定细胞活力，每孔加入20 μL MTS试剂，全程避光，继续培养3 h。利用酶标仪在490 nm波长检测各孔OD值。用ODtreat/ODcontrol表征细胞活力，计算细胞活力。细胞活力测定数据是基于三次独立的实验。
在细胞迁移过程中，细胞内上皮间充质转化（EMT）相关蛋白的表达量会发生相应的变化。为了检测外泌体与细胞孵育时间对EMT相关蛋白的影响，实验测定了加入1×1010个外泌体颗粒后，细胞在第1、3、4天EMT相关蛋白的表达量变化。如图所示，E-Cad蛋白的表达量在第3天逐渐减少至最初的0.7倍。N-Cad和Vimentin蛋白在第3天的表达量分别增加了1.5倍和1.4倍。以上结果说明外泌体与细胞共培养3天后，细胞内EMT相关蛋白变化更为显著。
图1外泌体与H1299细胞孵育时间对EMT相关蛋白的影响
为了进一步在蛋白水平上验证外泌体可以促进细胞迁移，我们提取共育3天的细胞蛋白质，检测EMT相关蛋白的表达变化。实验结果显示，随着外泌体浓度的增加，E-Cad蛋白表达降低，而N-Cad蛋白和Vimentin蛋白表达增加。上述结果可进一步证明捕获的外泌体可以诱导细胞迁移，具有良好的生物活性。
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