流动相pH影响信噪比改进措施?

遗忘曲线

2021/08/14

私聊

液相色谱（LC）

提高液相方法的灵敏度，应该怎么做呢？

首先，我们需要知道检测器需要一个好的工作环境，举个例子，这个意味着灯在全容量下工作，探测器的单元窗是干净的，使用一组标准的测试条件，最能验证探测器的性能。

首先要做的事情是在检查检测器的噪音与信号作为波长的函数，然后选择最好的信噪比波长，这随检测器、流动相和你试图分析的样品而不同。原则上，可变波长探测器的噪声与光电二极管接收到的光量成反比，这个也就是为什么检测器噪音会随着灯的使用时间增加与检测窗变脏而变大，因为流动相变得更加具有吸附性，这也是噪声增加的原因。例如，乙醇在210nm处具有显著的吸光度，而乙腈的吸光度非常低，这就是在低紫外线下使用乙腈降低噪音从而提高灵敏度的原因，在250nm甲醇和乙腈两个工作的同样好。

如果你需要使用一个流动相，它具有在样品响应良好的波长的背景，噪声和响应必须作为波长的函数来测量，有了这些数据，你可以计算哪个波长是最适宜实现最大信噪比，如果你有PDA检测器，这个就很简单了，您只需在峰值最大值获得一个波谱，并将其与流动相背景波谱进行比较。然后你选择信噪比最好的波长，现在，你已经为给定流动相选择了最好的波长，如果这些都不能满足你的要求，那你的工作前途渺茫啊。接下来最简单的事情是检查探测器时间常数的增加，或在现代探测器中内置的等效的降噪机制。如果你增加检测器时常或者其等效的降噪机制，色谱峰会变得更宽，噪音也会减少，如果你的色谱图峰相对少一点，这个方法会大幅对的提高信噪比，然而，如果你的色谱图峰特别的多，并且他们中有些峰的洗脱时间特别的早，那么这个方法有点不灵。另外你需要注意的是你样品的进样量，如果你在样品走完之前就看到了分离中的干扰，难免你应该思考溶解样品的溶剂，经常，可以溶解样品的溶剂组成的洗脱能力比流动相小很多，在你看到任意的峰型干扰前你可以进打印的样品，如果你的样品溶解在有机相中，而你的色谱条件是反向条件（例如流动相是甲醇水或者乙腈水），那你应该在你峰变形前注入少量的样品，另外一个方面，如果你在溶剂中含有20%的水，你可以注入一毫升的样品而没有明显的峰变形。样品只是在色谱法开始的柱的顶部丰富。

还有其他要注意的吗？

另外一个方法是减少色谱柱体积，然而，在你用这个建议的时候需要考虑好几个事情，首先，如果你的样品量确实有限，那么你需要确定在标准列上注入样品量是否需要有其他的规定，减少柱体积最简单的方法就是减少色谱柱的相关参数，保持柱长和粒径不变，举个例子，例如，柱的直径从4.6mm减少到2.0mm会使质量灵敏度增加约5倍，作为一个副作用，它降低了流量，从而使溶剂的消耗降低了大约相同的系数。作为一种权衡，仪器的峰展宽效应也是变得特别重要，仪器的峰展宽有可能减少色谱的洗脱，但你至少可以解决部分问题。仪器的峰展宽有两部分组成，首先是柱前的峰展宽，一个是由于进样体积，另外一个是由于进样器和通向柱的管道中的扩散，你可以用以下的技巧来减小这种影响：你可以用比流动相洗脱能力更小的溶剂溶解样品，用这样的溶剂稀释样品，并注入更多的样品，第二个部分就很让人烦了，柱后的峰展宽是由于色谱柱与检测器中间的管路以及检测器的样品池自身引起的，色谱柱到检测器的长度应该尽可能的短，由于你可以通过其他方法解决柱前管路体积的影响，最好将柱管路保持在绝对最低限度。检测器的样品池这个问题很棘手，一方面，你想要减少减少样品池体积来减少峰展宽，另一方面，样品池的减少，检测器的噪音却会增加，在最坏的情况下，减少柱体积和样品池的整个操作可能只会导致灵敏度的提高很少很少。

如何提高检测的信噪比？

或许你可以更换检测器，可能荧光或者电化学物质检测器比紫外检测器是个更好的选择，当然，新检测器可是很贵的啊。你的检测有一些更剧烈的变化，可以提高信噪比。当然，噪音是由于流动相组成引起的，我很早就说过乙腈相比甲醇可以减少在低紫外区的吸收，像这样的改变需要重新开放分离条件，另外一个是流动相里面的添加物也会引起检测器噪音，例如胺类常用于抑制峰拖尾，你可以通过使用更好的色谱柱来减少流动相添加剂的使用，例如，如果低灵敏度是由于峰拖尾造成的，通过使用更好的色谱柱来减少尾拖尾这样可以提高灵敏度约3倍。这些建议代表庞大的工作量，与其这样微乎其微的改善，还不如从头开发一个新的检测方法。

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