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关于SDS电泳MARKER的问题3
lijing320323
2022/04/27
私聊
食品常规理化分析
三、marker条带变宽怎么解决?
原因一:上样量过多,应该减少上样量。
对策:加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15μL(即2-10μg蛋白质)。如果样品很稀上样量可以达到100μL。
原因二:样品溶解不完全。
对策:
(1)样品应该充分溶解:保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解,上样前最好离心一下,实在溶解不掉的颗粒就去掉。
(2)可以根据分子量标准的蛋白质试剂盒的要求加入样品溶解液;如果是自行配置标准和未知样品,按照0.5-1.0mg/L样品溶解液。溶解后,将其转移至Eppendorf管,盖上盖子(可以在盖子处加上卡子)后在110度沸水中水浴加热3分钟(可以在薄泡沫塑料板上钻出几个与Eppendorf管直径形同的圆洞,Eppendorf管放下去直到盖子边缘约束不能再往下为止,把薄泡沫塑料板的暴露出Eppendorf管的管体大部分的那一面放入沸水浴锅中,薄泡沫塑料板自然飘在沸水表面,便于取用和加热,也可避免沸水溅起。可以一批对于多个Eppendorf管进行不同时间的沸水浴。不要把Eppendorf管扔进沸水浴锅中,盖子可能会被冲开),而后在室温下冷却待用。如果较长时间不用,则将样品放入零下20度冰箱中储存,需用时在取出后使用前在110度沸水中加热3分钟室温冷却后再上样,以去掉样品蛋白质中的亚稳态聚合体。
(3)改变样品缓冲溶液使得样品能够充分溶解,SDS 用量要充分。
原因三:SDS电泳带与邻近蛋白质电泳相连。除了上样量过多和样品溶解不完全外,凝胶的加样孔泄露会使得电泳带变宽。加样孔泄露往往由于凝胶与玻璃板之间产生裂纹引起。对策:此时只能重新制备凝胶,梳子拔起时要小心等凝胶凝聚完毕,速度不宜过快,拔起的方向要垂直于凝胶表面;要避免凝胶两侧的玻璃板与凝胶之间产生裂纹,在凝胶制备过程中不要挤压凝胶两侧的玻璃板。
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