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液相色谱方法开发

Insm_b759f1a

2023/01/16

液相色谱（LC）

液相小白
用的是岛津液相，色谱柱是C18柱，检测的物质是多肽产品，一开始设置流动相的比例是乙腈：水=90：10，分析时间26min。出峰时间在2分钟左右，
现在想要把保留时间延后到6min，改如何调节流动相的比例？
一般调节流动相比例的思路是怎样？什么时候该等度或者梯度？
关于流动相什么时候该加酸或者缓冲盐？麻烦大神们救救孩子吧！

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通标小菜鸟

第1楼2023/01/16

应助达人

1、将化合物出峰时间延后，可以通过降低初始流动相有机相比例，一般有机相比例越高，出峰越靠前。
2、如果是单一化合物，且无其它杂质干扰，那首选等度。如果是多目标物，且出峰比较近，分离度比较差，这时候选用梯度淋洗。
3、对于易电离化合物，出峰峰型不好，调节流动相比例无效的时候，就要考虑是否加酸或者缓冲盐来改善峰型

0

有水有渝

第2楼2023/01/16

应助达人

先把流动相的乙腈每次20%的比例往下降，先粗调后细调，看在什么比例时能达到你对保留时间的要求，如果峰形不好，先在流动相中加入总比例达0.05%的磷酸试试。

0

Insm_b759f1a

第3楼2023/01/16

老师，我有试着一直提高水相的比例一直是用等度的在跑，但是不知道怎么设置梯度？就是我设置等度的时候就是慢慢提高水相的比例，比较耗时，想知道这里面是有啥算法的吗？
通标小菜鸟(v3141805) 发表:1、将化合物出峰时间延后，可以通过降低初始流动相有机相比例，一般有机相比例越高，出峰越靠前。2、如果是单一化合物，且无其它杂质干扰，那首选等度。如果是多目标物，且出峰比较近，分离度比较差，这时候选用梯度淋洗。3、对于易电离化合物，出峰峰型不好，调节流动相比例无效的时候，就要考虑是否加酸或者缓冲盐来改善峰型

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