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甲醛衍生化方法的问题

液相色谱(LC)

  • 最近在做一个方法开发,是检测甲醛的,采用2,4-二硝基苯肼进行衍生化,方法开发的非常不顺利,希望各位能给指点一下,或者有什么别的方法能推荐一下更好
    首先说下溶液配制:。
    甲醛用的是40%的水溶液,称取50mg(也就是20mg甲醛)用乙腈溶到100mL,取5mL再稀释到100mL,再取5mL稀释到50mL
    衍生剂2,4-二硝基苯肼浓度1mg/mL
    盐酸1mol/L
    配法的话是2mL甲醛+2mL衍生剂+2mL酸,然后用50%的乙腈水稀释至20mL,60摄氏度水浴加热

    大概确定的是26min的这个峰为衍生产物,之前做过一次增大甲醛量的实验,结果是这个峰变大了,然后在这个基础上去探究衍生时间,衍生剂用量和酸用量的影响,温度控制60℃水浴加热,结果如下

    然后问题就来了,从结果里看出时间基本没什么影响15min就能衍生完,衍生剂用量越大峰面积越大,问题是出在这个酸的用量上,酸用量降低和减少这个峰都会变大,结果再详细看图的时候才发现,空白里居然有很大的干扰

    空白里的干扰已经接近3分之一了,然后就很疑惑,空白的配法只是把甲醛换成了50%的乙腈水,然后又发现这个峰似乎是2,4-二硝基苯肼里带进来了


    这个图峰漂移了,是因为我改了柱温,因为仪器的温控不太好,25℃控制不住,我后面就给升到30去了。和空白做对比的这个是1mg/mL的衍生剂,但是奇怪的是如果这个东西是衍生剂溶液带入的,那么空白里衍生剂浓度已经被稀释10倍了,结果这个峰大小却和没稀释前一样大,后来又做了一次实验,我只取衍生剂溶液用乙腈稀释10倍,这个峰的大小就降低了,差不多是10倍左右
    然后又把盐酸换成了50mmol/L的对甲苯磺酸,结果这个峰还是有,方法也稍微改了下


    做到这里我真的实在找不到头绪,我现在特别怀疑这个峰根本不是衍生产物。后续各位大佬有没有什么实验建议啊,或者有没有什么更好的方法能推荐一下,前段时间有开发气相顶空的方法去检测甲醛,但是那个方法开发的也不是很顺利,峰型很难看,用的是WAX的色谱柱。
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  • 歌名

    第1楼2023/03/17

    应助达人

    兄弟,你加2ml酸这个是参考啥文献的吗?裸露的羧基很容易跟2.4-二硝基苯肼反应,生成的衍生化产物在质谱里面响应还巨高,你看可参考下很多做有机酸拟靶的,基本都是有机酸 硝基苯肼衍生化上机的,建议是再看看文献,把酸换掉

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  • 箫琼

    第2楼2023/03/17

    这个是色谱条件,色谱柱是安杰尔的Venusil MP-C18,250*4.6*5,今天的话是把水溶液换成了0.1%的三氟乙酸

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  • 箫琼

    第3楼2023/03/17

    其实我是不太明白的。以前我是没做过液相衍生的,领导是说之前做乙醛的时候这么干衍生成功了,我确实是搞不太明白,所以才毫无头绪

    歌名(Ins_eedcdc41) 发表:兄弟,你加2ml酸这个是参考啥文献的吗?裸露的羧基很容易跟2.4-二硝基苯肼反应,生成的衍生化产物在质谱里面响应还巨高,你看可参考下很多做有机酸拟靶的,基本都是有机酸 硝基苯肼衍生化上机的,建议是再看看文献,把算换掉

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  • xiaolanzi5

    第4楼2023/03/20

    应助达人

    根据您的描述,严重怀疑您认为的目标峰不是真正的衍生后的目标峰。

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  • dadgoh

    第5楼2023/03/21

    应助达人

    你是想测哪里的甲醛。

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  • abzh99312

    第6楼2023/03/21

    如果样品性质不一样,忽略样品处理环节,衍生和测试可直接引用。
    开发个毛啊,现成的方法,成熟的条件。

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  • sue

    第7楼2023/03/23

    之前测甲醛有试过用乙酰丙酮衍生

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