几个关于光度计和标准曲线的问题

Ins_8104aea7

2023/08/27

私聊

紫外可见分光光度计（UV）

我以前单光束光度计的对比溶液调零用的是溶剂加显色剂，也就是空白做对比，然后测量浓度梯度吸光度，做的标准曲线直接代入，也将（0,0）点代入。当然我这个步骤不知道是否正确。
现在在新的使用条件下遇到了问题，前辈用的方法部分参照国标进行，国标里没有相关标准曲线的详细步骤，步骤是双光束光度计用两个蒸馏水调零，然后浓度梯度的溶液放入测试槽测出吸光度，梯度里包含空白（蒸馏水和显色剂），然后空白也能测出吸光度。比如空白的吸光度为X，浓度1的吸光度为Y，浓度2的吸光度为Z…… 标准曲线代入的点（0,X)(1,Y)(2,Z)…… 计算的时候待测式样测得的吸光度减去空白再代入标准曲线方程。
这里就有个问题：我觉得标准曲线应该为代入点（0,0)(1,Y-X)(2,Z-X)…… 然后待测式样测出的吸光度减去空白的再代入曲线才对。或者标准曲线不带入（0,0)点。
然后查了很多都没有详细说到这个标准曲线的，最多就是讨论应该用空白做对比调零还是用溶剂做对比调零。这里求助大佬们关于标准曲线的问题。

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Willdo

第1楼2023/08/28

应助达人

一、标准曲线用试剂空白做参比，用（0,0）、（1,x）、（2,y）...拟合曲线。待测样品（包括样品空白）也用试剂空白做参比，代入曲线计算得到待测样品和样品空白浓度值（至于样品最终结果需不需要减去样品空白，依据检测标准的要求来）；
二、标准曲线（包括试剂空白）用蒸馏水做参比，此时试剂空白有吸光值，用(0,x）、（1,y）、（2,z）...拟合曲线。待测样品（包括样品空白）也用蒸馏水做参比，代入曲线计算得到待测样品和样品空白浓度值（此时样品最终结果一般需要减去样品空白结果，但标准有特殊规定的除外）；
三、标准曲线（包括试剂空白）用蒸馏水做参比，此时试剂空白有吸光值x，用用(0,0）、（1,y-x）、（2,z-x）...拟合曲线。待测样品（包括样品空白）也用蒸馏水做参比，减去试剂空白吸光值x后再代入曲线计算。其实这种做法和第一种方法的原理是一样的，反而增加了计算量。
一般如果检测标准没有特定规定的，都用试剂空白做参比。

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ztyzb

第2楼2023/08/28

应助达人

我以前单光束光度计的对比溶液调零用的是溶剂加显色剂，也就是空白做对比，然后测量浓度梯度吸光度，做的标准曲线直接代入，也将（0,0）点代入。当然我这个步骤不知道是否正确。
楼主，这样计算的结果没问题，样品吸光值直接带入曲线即得结果
现在在新的使用条件下遇到了问题，前辈用的方法部分参照国标进行，国标里没有相关标准曲线的详细步骤，步骤是双光束光度计用两个蒸馏水调零，然后浓度梯度的溶液放入测试槽测出吸光度，梯度里包含空白（蒸馏水和显色剂），然后空白也能测出吸光度。比如空白的吸光度为X，浓度1的吸光度为Y，浓度2的吸光度为Z…… 标准曲线代入的点（0,X)(1,Y)(2,Z)…… 计算的时候待测式样测得的吸光度减去空白再代入标准曲线方程。
这里就有个问题：我觉得标准曲线应该为代入点（0,0)(1,Y-X)(2,Z-X)…… 然后待测式样测出的吸光度减去空白的再代入曲线才对。或者标准曲线不带入（0,0)点。
楼主，应该带入（0,0)点
然后查了很多都没有详细说到这个标准曲线的，最多就是讨论应该用空白做对比调零还是用溶剂做对比调零。这里求助大佬们关于标准曲线的问题。
楼主，其实哪种计算方式都可以，像生态环境类别就是实验用水或者萃取溶剂做参比，然后绘制标曲时扣除零浓度点吸光值，样品计算时也减去零浓度点吸光值