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蛋白标签类型有哪些?融合标签的优缺点介绍
Ins_bf0c01c3
2023/09/01
私聊
生命科学仪器综合讨论
蛋白标签
是指与靶蛋白相连的融合蛋白(参阅什么是融合蛋白)的亚结构域或肽序列。有许多在重组蛋白生产中广泛应用的蛋白标签。蛋白标签是一种方便有效的工具,可以提高重组蛋白的溶解性、简化蛋白纯化,并提供了一种在蛋白表达和纯化过程中跟踪蛋白的简便方法。
根据不同的应用,融合标签主要分为三类:表位标签、亲和标签和荧光标签。
①表位标签往往是短肽序列,可用于免疫学应用,如
Western Blot
和免疫共沉淀。
②亲和标签一般较长,可用于蛋白纯化或增加蛋白溶解度。
③荧光标签可用于活细胞和死细胞,并广泛用于影像学研究,如细胞定位和共表达实验。
标签揭秘选择
C
端还是
N
端?
选择将标签融合到目标蛋白的
C
端还是
N
端,很大程度上取决于蛋白本身:蛋白的折叠方式,以及您选择的末端是否有功能要求。例如,如果
C
端在蛋白内部折叠,那么您收到融合蛋白信号的可能性非常小;或者,如果蛋白在标签融合末端进行翻译后剪切,那么标签将从目标蛋白中移除。
如果有资源或准备开展新型实验,最好同时克隆
C
端和
N
端标签的构造,从而确定最佳选择。一研究小组发现,与
N
端的标签融合蛋白相比,更多的
C
端融合蛋白定位于目标亚细胞腔隙。但是,需要强调的是,虽然
C
端标签蛋白的定位和表现往往符合预期,但并不是始终可以预测。融合蛋白定位是否正确,可通过免疫荧光进行检测;免疫印迹有助于确认融合蛋白的大小是否正确并以预期的水平表达,免疫共沉淀有助于评估融合蛋白与已知底物的相互作用方式。
融合标签优缺点:
优点:无需特异性蛋白即可分离目标蛋白;有时可在纯化后裂解标签;可将多个标签连接到同一蛋白上,增加其功能;避免免疫沉淀中出现抗体干扰;荧光标签可用于显示活细胞中的蛋白;多种标签供选择,适合不同的应用。
缺点:某些标签可能会影响蛋白功能;可能需要多次尝试才能找到最佳标签位置,导致实验成本增加。
更多详情可以关注义翘神州蛋白标签页:
https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag
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