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离子交换层析原理和步骤
Ins_bf0c01c3
2023/09/07
私聊
生命科学仪器综合讨论
离子交换层析
(IEX)
是一种主要基于蛋白净电荷的色谱分离方法,通常用于追踪脱酰胺和琥珀酰亚胺的形成。
IEX
有两种类型:阳离子交换和阴离子交换层析法。当缓冲液
pH
值高于此
IP
时,蛋白带负电(阴离子);当
pH
值低于此
IP
时,蛋白带正电(阳离子)。
所有蛋白都表现出净电荷,这取决于蛋白氨基酸组成和任何共价连接的修饰。蛋白净电荷受溶解它的溶剂
pH
所影响,因为溶剂会与蛋白进行氢离子交换。通常情况下,蛋白与
IEX
的结合必须通过反复试验来确定,使用一系列
pH
值的溶剂以确定蛋白保留的最佳
pH
。通常溶剂的
pH
值与
pI
相差约一个
pH
单位就足以实现蛋白结合。
离子交换层析(
IEX
)具体操作步骤:
平衡
第一步是固定相的平衡。当达到平衡时,所有的固定相带电基团都与可交换的平衡离子结合,如氯或钠。选择起始缓冲液的
pH
和离子强度,以确保目标蛋白与介质的结合。
上样和清洗
第二步的目标是结合目标分子,并清洗出所有未结合的物质。
洗脱
随着离子强度的增加,在选定的
pH
值下净电荷最低的蛋白将最先从柱子上洗脱。同样地,在一定
pH
值下电荷最高的蛋白被保留得最牢固,并且在最后被洗脱。
再生
最后用高离子强度的缓冲液进行最后一次清洗,使色谱柱再生,并去除任何仍结合的分子。然后在开始下一次运行之前,色谱柱需要在起始缓冲液中重新平衡。
以上是对离子交换层析原理和步骤的详解,具体来源可参看:
https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec
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