ODC1在DLBCL中的表达及ODC1低表达细胞模型的构建
ODC1 低表达细胞模型的构建
应用慢病毒感染技术敲低DLBCL细胞系Pfeiffer ODC1的表达,同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响,待细胞状态良好使用嘌呤霉素筛选;荧光显微镜下观察如图,可见Pfeiffer-shNC、Pfeiffer-shODC1-1、Pfeiffer-shODC1-2细胞均产生绿色荧光,表明人DLBCL细胞系慢病毒感染成功。
图 慢病毒感染后 4X 荧光显微镜下图片(Pfeiffer明场及荧光照片)
敲低 ODC1 后转录水平和蛋白水平验证
分别提取对数生长期的Pfeiffer-NC、Pfeiffer-shODC1-1、Pfeiffer-shODC1-2细胞的RNA和蛋白,利用q-PCR 技术分别检测各细胞ODC1 mRNA 相对表达量,结果如图所示,与对照组相比,Pfeiffer-shODC1-1、Pfeiffer-shODC1-2组ODC1 mRNA 表达量明显降低(P <0.001)。利用Western blot技术检测各细胞内 ODC1 蛋白的表达情况。结果如图所示,与对照组相比,ODC1蛋白表达在Pfeiffer-shODC1-1、Pfeiffer-shODC1-2细胞中明显降低。表明ODC1低表达细胞模型构建成功。
图 敲低 ODC1 在转录水平和蛋白水平的验证(***P <0.001)
小结
1. 公共数据库分析显示ODC1在DLBCL中的表达高于正常组织,与DLBCL的分期无明显关系,高表达ODC1的DLBCL的DFS明显降低;实时荧光定量PCR(q-PCR)及Western blot结果显示ODC1在人DLBCL细胞系中的表达均显著增加。
2. 应用shODC1慢病毒载体感染Pfeiffer细胞后,利用q-PCR及Western blot实验验证ODC1在mRNA及蛋白水平的表达,结果显示,与对照组相比,Pfeiffer-shODC1组ODC1的mRNA及蛋白的表达明显降低。表明ODC1低表达细胞模型构建成功,可以用于后续实验。