流动相添加三氟乙酸基线陡增

应助达人

请教大家，测定多肽纯度时，使用0.1%的三氟乙酸水/乙腈做流动相，检测波长为210nm。如接色谱柱，在梯度发生变化时，基线会陡增，之后稳定；但如果接两通，基线不会出现陡增而是缓慢上升，不知道大家有没有遇到这种情况？有没有办法降低基线的陡增？

首先，造成这种的原因有两方面，我认为第一个是三氟乙酸本身引起的，低波长的强吸收。不管是缓慢还是陡增。第二个有可能是因为你使用时是不是只用了水相加三氟乙酸，一般做这个，可以有机相也要加一点。梯度变化时，柱子中压力较大，两相没有混合好或者其他原因导致陡增或者漂移，而两通压力较小，所以只会缓慢增加。当然柱子本身也可能影响。
所以可能的排查和解决方法，第一，有没有新柱子，可以试一下。第二，看是否需要波长调整一下。第三，如果有机相没有加，可以加同比例的三氟乙酸。第四，换掉三氟乙酸，看看文献，选择其他试剂。

非常感谢您的回复。仪器和色谱柱都是新的；多肽最大吸收波长是210nm，所以波长不好调整；有机相里也添加了0.1%的三氟乙酸。其实缓慢上升是可以接受的，但是只在梯度变化的一瞬间陡增，后面又平稳了，感觉没法解释，出报告的时候图谱也不好看。

应助达人

梯度平缓一点。

应助达人

有空可以把方法和图谱放一下。

应助达人

210下三氟乙酸是有紫外吸收的，可以有机相与水相中都加入同等比例的三氟乙酸，这样不管梯度怎么变化三氟乙酸的比例都不会变，另外有机相用的是甲醇还是乙腈，最好用乙腈，紫外吸收小，把你的流动相变化过程发上来看一下。