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实验室自制发酵菌

食品常规理化分析

  • 在实验室自制发酵菌需要在严格的无菌条件下进行,以下是一般的步骤和注意事项:

    一、准备工作


    • 设备和材料准备
      • 超净工作台:提供无菌操作环境。
      • 高压灭菌锅:对培养基、培养皿、移液管等进行灭菌。
      • 恒温培养箱:提供适宜的温度进行菌种培养。
      • 天平、量筒等:用于准确称量和量取试剂。
      • 培养基原料:如蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖、琼脂等,根据所需菌种选择合适的培养基。
      • 无菌水、移液管、培养皿、锥形瓶等。

    • 环境消毒
      • 在进行实验前,对实验室进行全面消毒,包括桌面、地面、墙壁等。可以使用紫外线照射、化学消毒剂擦拭等方法。
      • 确保超净工作台的过滤器正常工作,开启超净工作台进行通风和紫外线照射,进一步净化操作环境。


    二、菌种来源选择


    • 从自然界分离
      • 可以从土壤、水体、植物表面等环境中采集样品,通过稀释涂布法、平板划线法等分离出单一的菌种。
      • 例如,从果园土壤中采集土样,经过一系列处理后,在特定的培养基上培养,挑选出具有发酵潜力的菌落进行进一步培养和鉴定。

    • 已有菌种保藏中心获取
      • 如果实验室有菌种保藏条件,可以从专业的菌种保藏中心购买或申请所需的菌种,然后进行活化和培养。
      • 在使用外来菌种时,要确保其来源可靠、无致病性和污染风险。


    三、培养基制备

    • 按照配方准确称量培养基原料,加入适量的蒸馏水溶解。
    • 将溶解后的培养基装入锥形瓶中,用棉塞或硅胶塞封口。
    • 将锥形瓶放入高压灭菌锅中进行灭菌,一般在 121℃下灭菌 15-20 分钟。
    • 灭菌后的培养基在超净工作台中冷却至适宜温度(一般为 45-50℃),然后倒入无菌培养皿中,待其凝固备用。


    四、菌种培养

    • 如果是从自然界分离菌种,将采集的样品进行适当处理后,用无菌移液管吸取少量样品,涂布在培养基表面。
    • 如果是活化已有菌种,用无菌接种环从保藏菌种中挑取少量菌体,划线接种在培养基表面。
    • 将接种后的培养皿放入恒温培养箱中,根据菌种的特性设置适宜的温度和培养时间。例如,乳酸菌一般在 37℃下培养 24-48 小时。


    五、菌种筛选和鉴定

    • 观察培养皿中的菌落形态,挑选出具有所需发酵特性的菌落,如形态规则、生长旺盛、有特定颜色等。
    • 对筛选出的菌落进行进一步的鉴定,可以通过显微镜观察菌体形态、生理生化试验、分子生物学方法等确定菌种的种类。
    • 将鉴定后的菌种进行纯化培养,确保菌种的纯度。


    六、菌种保存


    • 短期保存
      • 可以将菌种接种在斜面培养基上,放入冰箱冷藏保存,一般可保存数周至数月。
      • 定期转接菌种,以保持其活性。

    • 长期保存
      • 采用冷冻干燥法、液氮保存法等进行长期保存。
      • 冷冻干燥法是将菌种在保护剂的作用下冷冻干燥,然后密封保存于低温环境中。液氮保存法则是将菌种悬浮在液氮中,可长期保持菌种的活性。


    七、注意事项


    • 严格无菌操作
      • 在整个实验过程中,要始终保持无菌意识,严格遵守无菌操作规范。所有操作都要在超净工作台中进行,使用的工具和材料都要经过灭菌处理。
      • 避免交叉污染,不同菌种的操作要分开进行,使用的工具和培养皿等要专用。

    • 安全防护
      • 对可能具有致病性的菌种进行操作时,要采取相应的安全防护措施,如佩戴手套、口罩、实验服等,在生物安全柜中进行操作。
      • 严格遵守实验室的安全规定,避免发生意外事故。

    • 记录和标识
      • 对实验过程中的每一个步骤都要进行详细记录,包括菌种来源、培养基配方、培养条件、鉴定结果等。
      • 对培养的菌种进行明确标识,注明菌种名称、培养日期、保存条件等信息,以便于管理和使用。
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