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液相色谱(LC)
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等度洗脱与梯度洗脱的理解
p3203140
2024/08/30
私聊
液相色谱(LC)
等度洗脱,即是流动相比例不变,随洗脱时间逐渐将样品峰洗脱下来,前提是样品中各个组分与填料的吸附强度差别不是很大。
梯度洗脱,是流动相的比例随时间不断同方向变化,也就是洗脱强度大的一相比例逐渐增大,将样品峰逐个洗脱下来。样品中各组分与填料的吸附强度差异很大时须用到梯度洗脱。
我们在追求高柱效时,梯度洗脱也会给我们一个比较好的结果,梯度洗脱的峰型往往很尖锐,不管出峰多靠后,梯度的斜率越大,越尖锐。而等度洗脱的峰型,保留时间越长,峰展越宽。这是因为等度洗脱这个流动相比例,刚好可以将样品峰洗脱下来,但是需要时间,是在时间的帮助下慢慢从柱头走到柱尾,这种情况就会扩散比较严重。而梯度洗脱,样品进入柱子后,初始比例的流动相不足以让样品从填料上洗脱下来,即停在柱头附近,当流动相比例达到其中一个组分的洗脱强度时,这个组分就会快速通过色谱柱,当比例达到下一个组分的洗脱强度时,又快速洗脱下来一个峰,因此避免了扩散现象。
等度洗脱的保留时间往往没有梯度洗脱的保留时间稳定。这种情况可能由多种因素导致,比如等度洗脱样品峰在色谱柱中运动时间长,变数就多;峰展宽也会造成一定的偏差。而梯度洗脱,只要泵的比例精确度不差,出峰的时间就很稳定。
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