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【金秋计划】微生物内部质量控制之阳性加标
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2024/09/09
私聊
食品毒素/微生物检测
金黄色葡萄球菌定性检测阳性加标实验
01
金黄色葡萄球菌菌悬液的制备
在生物安全柜内,按照无菌操作程序,制备金黄色葡萄球菌斜面培养物,挑取培养物加入灭菌生理盐水中,制成macF为0.5的菌悬液,吸取1mL上述菌悬液加入9mL灭菌生理盐水中制成1:10的稀释液,依次进行梯度稀释,稀释至金黄色葡萄球菌终浓度为1CFU/mL~10CFU/mL,待用。同时吸取1mL菌悬液涂布TSA平板,计数菌悬液具体浓度值。
02
阳性对照加标样品制备
食品样品检测过程中,另外称取25g样品,加入225mL增菌液,均质混匀,制成对照样品匀液,用封口夹密封,转移至生物安全柜内,无菌操作吸取1mL待用金黄色葡萄球菌悬液加入对照样品匀液,充分混匀,即为阳性加标实验样品,封口夹密封后放培养箱培养,按照GB 4789.10中第一法的规定进行检验和鉴定。
03
结果判定
经检验,检出金黄色葡萄球菌即满足监控结果与添加目标微生物的一致性,结论为满意。
金黄色葡萄球菌平板计数法阳性加标实验
01
金黄色葡萄球菌菌悬液的制备
参照1.1步骤,金黄色葡萄球菌稀释至终浓度为1000CFU/mL~10000CFU/mL,待用。同时吸取100uL菌悬液涂布TSA平板,计数菌悬液具体浓度值。
02
阳性对照加标样品制备
食品样品检测过程中,另外称取25g样品,加入225mL稀释液,均质混匀,制成对照样品匀液,用封口夹密封,转移至生物安全柜内,无菌操作吸取1mL金黄色葡萄球菌悬液加入对照样品匀液,充分混匀,制成1:10阳性加标匀液,后续按照GB 4789.10中第二法的规定进行检验和鉴定。
03
结果判定
如果参比TSA平板结果为1500CFU/mL,即1mL菌悬液中约有1500CFU的金黄色葡萄球菌,吸取1mL加入250mL阳性加标匀液中,可表示为25g加标样品中含有金黄色葡萄球菌的理论浓度为60CFU/g;采用平板计数法检验,加标样品的检验结果为50CFU/g,计算回收率为(50÷60)×100%≈83.3%,参照RB/T038-2020中B.1规定,回收率大于80%即可判定为结果满意,因此该阳性加标定量检测结论为满意。
金黄色葡萄球菌MPN计数法阳性加标实验
01
金黄色葡萄球菌菌悬液的制备
参照1.1,金黄色葡萄球菌稀释至终浓度100CFU/mL~1000CFU/mL,同时吸取100uL菌悬液涂布TSA平板,计数菌悬液具体浓度值。
02
阳性对照加标样品制备
参照2.2步骤进行,后续检验操作按照GB 4789.10中第三法规定进行检验和鉴定。
03
结果判定
如果参比TSA平板结果为150CFU/mL,即1mL菌悬液中约有150CFU的金黄色葡萄球菌,吸取1mL加入250mL阳性加标匀液中,即25g加标样品中含有金黄色葡萄球菌的理论浓度为0.6 MPN/g。采用MPN计数法检验,如果3×3法检测结果为3-0-0,查MPN表,结果为2.3MPN/g,95%置信区间为(0.46~9.4)MPN/g,则理论值0.6CFU/g在(0.46~9.4)MPN/g之间,表明此次阳性加标结果满意,因此该阳性加标定量检测结论为满意。
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