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高效液相色谱技能篇|关于方法验证中常见几个概念的小知识(3)
p3203140
2024/09/12
私聊
液相色谱(LC)
我们今天接着说:
检测限和定量限
检测限 (LOD) 系指
样品中的分析物能够被检测到的,但不需要被准确定量的最低含量。它是一个指定分析物的含量是否超过或低于一个定值的限量实验,一般被定义为3 倍的 S/N。
定量限 (LOQ)是指
样品中的分析物可被分析方法定量测定的最小浓度,此定量测定应该具有可接受的准确度和精确度,一般被定义为10 倍的 S/N。
01.检测限的计算方法
1)直观法
用已知浓度的被测物,试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。主要是通过配制一系列已知浓度的样品来试验,直至能够明显观察到信号或色谱峰。
2)信噪比法
用于能显示基线噪声的分析方法,即将已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较,计算岀能被可靠地定量的被测物质的最低浓度或量。一般以信噪比为3︰1时相应浓度或注入仪器的量确定定量限。(一般会重复3次)
但是噪声范围是人为选定的,所以检测限的结果值可能会稍微受到主观性的影响。
3)基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法
按照LOD=3.3δ/S公式计算。式中LOD:检测限;δ:响应值的偏差;S:标准曲线的斜率。δ可以通过下列方法测得:①测定空白值的标准偏差;②标准曲线的剩余标准偏差或是截距的标准偏差。
02.定量限的计算方法
1)直观法
用已知浓度的被测物,试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。主要是通过配制一系列已知浓度的样品来试验,直至能够明显观察到信号或色谱峰。
2)信噪比法
用于能显示基线噪声的分析方法,即将已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较,计算岀能被可靠地定量的被测物质的最低浓度或量。一般以信噪比为10︰1时相应浓度或注入仪器的量确定定量限。(一般会重复3次)
但是噪声范围是人为选定的,所以检测限的结果值可能会稍微受到主观性的影响。
3)基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法
按照LOQ=10δ/S公式计算。式中LOD:检测限;δ:响应值的偏差;S:标准曲线的斜率。 δ可以通过下列方法测得:①测定空白值的标准偏差;②标准曲线的剩余标准偏差或是截距的标准偏差。
03.基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法中δ的计算方法
1)测定空白值的标准偏差
a.准备空白样品:准备多个空白样品,这些样品应该只包含溶剂和可能的辅料,但不包含待测物质。
b.测定响应值
:
使用您的分析仪器(如HPLC、UV-Vis光谱仪等)对每个空白样品进行测定,并记录响应值(如峰面积、吸光度等)。
c.假设得到了7个浓度(0.010、0.011、0.009、0.012、0.010、0.008、0.010),计算其响应值的平均值=0.01
d.计算每个响应值与平均值的偏差X
1
e.计算偏差的平方和X
2
f.计算标准偏差δ=
2)标准曲线的剩余标准偏差
a.选择浓度和响应值:选择一系列已知浓度的标准样品,并测定它们的响应值(如吸光度、峰面积等)。
b.进行线性回归分析:使用这些数据点进行线性回归分析,得到标准曲线方程 y=a+bx,其中 a是截距,b是斜率。
c.
计算每个数据点的预测值:使用标准曲线方程,为每个已知浓度的样品计算预测的响应值。
d.计算残差、残差平方和
e.计算剩余标准偏差SE=
3)再代入LOD或者LOQ的公式中进行计算
在通则9101里面也有明确规定,通过
上述计算方法获得的定量限数据须用含量相近的样品进行验证。应附测试图谱,说明测试过程和定量限结果,包括准确度和精密度验证数据。
(后续讲解......)
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