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液相色谱(LC)
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如何使用高效液相色谱法(HPLC)检测面膜中氨基酸含量
Ins_f1bcac7d
2024/09/24
私聊
液相色谱(LC)
使用高效
液相色谱
法(HPLC)来测面膜里的氨基酸,咱们得一步步来,确保每个环节都搞定。
一、准备样品
采集样品:首先,得找些有代表性的面膜样品,别让它被污染了。
提取氨基酸:面膜里的氨基酸藏得深,数量还少,得用点儿技巧才能提出来。比如,先把面膜放到离心管里,加点水(如果是液体面膜就不用额外加了),然后晃一晃,用超声波处理一下,再加热煮煮,冷却后加点磺基水杨酸,再晃一晃,离心一下,把清亮的液体收集起来,用磺基水杨酸定个容,备着用。
让氨基酸显个色:氨基酸自己看不见摸不着,咱们得给它化个妆,让它能被检测到。这时候,DNFB这个化妆师就上场了,它在特定条件下(比如60℃水浴里热个10分钟)能让氨基酸变得有颜色,这样我们就能在仪器上看到它了。
二、设置HPLC条件
选柱子:得找个合适的色谱柱来分离这些氨基酸,就像用筛子筛沙子一样,不同的筛子筛出来的效果不一样。常用的有C18反相色谱柱,咱们得试试哪种尺寸和粒径的柱子分得最好
配流动相:流动相就是推着样品在柱子里跑的液体,一般是有机相(比如乙腈)和水相(比如乙酸钠缓冲液)混合的。咱们得配好这个比例,让氨基酸能顺畅地跑。
选检测波长:每种氨基酸化妆后的颜色不一样,对光的反应也不一样。咱们得选个能看清它们颜色的光波长,一般选360nm左右就差不多了。
三、分析和计算
画标准曲线:先用已知浓度的氨基酸溶液走一遍流程,画个曲线图,这样咱们就知道仪器测出来的信号和氨基酸浓度是怎么对应的了。
测样品:把处理好的面膜样品溶液也走一遍流程,记录下色谱图,看看各个氨基酸的峰面积是多少。
算结果:用标准曲线和峰面积,咱们就能算出面膜里有多少氨基酸了。别忘了考虑回收率和测量的准确度哦。
四、小贴士
全第一,操作时一定要遵守实验室的规定。
实验条件要稳定,这样结果才可靠。
不同的面膜可能得用不同的提取和化妆方法,得灵活调整。
这样,咱们就能用HPLC法准确地知道面膜里有多少氨基酸了
。
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