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【转帖】高效液相色谱柱的正确使用及维护３

quguohua

2007/04/27

液相色谱（LC）

4. 1　柱的安装与拆卸　色谱柱属易耗品,需要不断更换。高
效液相色谱柱的安装是一项经验性很强的工作,在安装之前
一定要仔细清洁密封卡套和接头端面,不能残留固体颗粒。
要保证管道端面与柱头端面的良好结合,不能留有死体积。
接头等组件不要拧的过紧,适当上紧后开机试验,以恰好不泄
漏为宜,防止用力过大而导致管道变形或用力不足而发性泄
漏,若用力过大锥形卡套已将管道挤压变形,可将管道前端连
同卡套切割掉,再用金钢锉小心磨平端面,洗净锉屑和毛刺后
重新连接。目前多数在用高效液相色谱仪柱前流路系统为金属材质,柱接头采用固定板手紧固,在紧固螺母时不要一下用
力过猛,防止锥形卡套卡死在阴接头内无法取出。为避免这
种现象,有些厂家(如安捷伦公司) 已使用有固定接头的
PEEK管代替金属管,用手动紧固代替板手紧固,但要特别注
意接头尺寸(口径和接口深度)的匹配。大连物化所色谱中
心生产的一种通用接头可适用于不同内径的管道,而且采用
手动紧固,非常方便。即使不同厂商标示的接头规格相同,也
最好使用同一厂家的色谱柱和接头,以确保连接的可靠性。
柱后端为低压连接,无论板连接还是手动连接,稍用力即可保
证不漏。
4. 2　柱污染的处理　常见的柱污染有柱头烧结滤板堵塞、柱
头内填料污染和柱内有盐结晶析出。柱污染的常见症状是柱
压突然升高及出现鬼峰,简单的处理是选择能溶解污染物的
流动相,将色谱柱反接后进行冲洗,冲洗时柱出口端与检测器
断开以防污染检测器,冲洗液体积约为20～30 倍色谱柱容
积。对于一些保留强的污染物,如脂类可用四氢呋喃、乙腈或
甲醇冲洗;蛋白质类可用乙腈、丙醇和1%三氯乙酸进行梯度
洗脱;高疏水性化合物可用乙腈或甲醇洗脱。另外,有些文献
提出了各种填料色谱柱的再生方法[ 5 ] ,可参照使用。
上述方法无效时,可尝试拆洗烧结滤板或挖补柱头处填
料的方法处理,但这两种方法都需打开柱头,会破坏柱床的整
体均匀性,一般不轻易使用。当确定是柱内盐结晶析出时,可
用纯水或低甲醇含量( 5% )的甲醇2水混合液冲洗至基线稳
定。
4. 3　柱塌陷的处理　色谱柱经一段时间使用后,特别是流动
相压力变化过大或酸碱度不当时,会发性柱头塌陷,使峰形异
常(分岔) 。其处理方法是打开柱头,拆下烧结滤器,用工具
小心刮平柱床端面(可同时除去少量柱头被污染的填料) ,用
甲醇与填料混合成均浆液,将均浆液滴在柱头上,靠重力排除
甲醇液,直到柱头凹陷处平整,再小心复原柱头。带有柱套的
色谱柱柱端烧结滤器是镶嵌在柱端封口塑料塞的内侧,封口
塑料塞直接挤压进柱管,在拆卸时,应从侧面用金属薄片插入
缝中小心撬开,不可直接用钳子拨出,以防止塑料塞受挤压而
变形。不带柱套的色谱柱由螺母直接将分配器和烧结滤片压
在柱端,在取下和装上烧结滤片时一定要沿轴向进行,轻轻放
入后不可再转动,以免破坏柱床。
4. 4　柱的贮存与管理　色谱柱长期不用时,应进行适当的处
理后保存。首先应用适合于柱填料的溶剂充分冲洗柱子,极
性填料色谱柱可用二氯甲烷冲洗;键合相填料色谱柱用甲醇
冲洗;阴离子交换色谱柱用0. 002%洗必泰的缓冲液冲洗;阳
离子交换色谱柱用0. 005%硫柳汞缓冲液冲洗;凝胶色谱柱
用缓冲液中加0. 02%叠氮化钠或用20%乙醇冲洗,然后用随
柱所配的封头螺帽将柱两端密封,以防止柱内溶剂蒸发[ 2 ] 。
除了正确的使用外,还应建立严格的管理制度,应给每一
根新购色谱柱建立柱档案,包括生产厂家、柱编号、填料类型、
购进时间、启用时间、保护液名称等。在色谱柱的使用过程
中,也应记录每批样品的柱压、柱效(理论板数) 、每日进样次
数等,以便动态的掌握色谱柱的性能变化。有条件的单位最
好一根柱子只用于分析某一类结构相似的物质,如化学组成
明确的样品与含有未知组分的样品分开,中药样品与西药样
品分开,生物合成样品与人工合成样品分开等,这样可避免样
品对色谱柱的交叉污染,延长柱使用寿命。对于柱效确已降

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