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母离子扫描方法建立标准操作规程

zhangyongmei

2024/10/03

私聊

液质联用（LCMS）

1. 目的

对结构相似的多个化合物（至少3个）建立规范的母离子扫描检测方法

2. 责任

实验员：需严格按照此操作规程进行实验操作，如遇到特殊情况需要修改SOP需经分领导批准；

质量负责人，质量监督员：监督、抽查SOP执行情况。

3. 操作程序

3.1 实验准备

3.1.1各取1ml配制好的100ppb目标分子溶液，再配取1ml多种结构相似的目标分子溶液混合物（按相同比例），备用；

3.1.2连接好注射泵专用管路，用1ml针泵，抽1ml50%甲醇推出去，重复3次；

3.1.3在Qtrap5500仪器的硬件配置 Hardware Configure 菜单中选择 MS Only ( 只连质谱仪 )进行Active 激活；

3.1.4点击

，确认压力在0.4~1.1×10-5torr之间；

3.1.5点击左边导航栏 Navigation Bar 的Tune and Calibrate 进入调谐模式，点击

，

点击

进入ready状态；

3.1.6 点击上方工具条中的

按扭，双击Mannul Tuning，进入手动调谐模式；

3.2调用已有Project或新建Project

见《 AB SCIEX QTRAP550维护SOP》，新建Project以项目编号命名；

3.3 母离子确认

3.3.1用1ml注射器吸取某一个目标分子溶液，赶出气泡，将其置于质谱的针泵放好；

3.3.2选择Syringe Pump Method,勾上use（

），选择注射器型号：直径4.61mm，先以大流速（如30μl/min）跑1min，点击Start Syringe，开针泵，稳定后改为5μl/min的流速；

3.3.3切换到Mass Method，选择Scan Type：Q1 MS(Q1)，设置扫描范围（Start:50,Stop:目标分子相对分子质量+50），其余参数参考图4.1设置；

图3.1

3.3.4检查信号稳定性，输入信号采集时间为5min，点击Start，观察TIC图及质谱图，信号稳定时，TIC图为一条直线，若否，先查看注射器是否有气泡，再调整CUR、GS1等参数，直至信号稳定；

4.3.5信号稳定后，输入信号采集时间为1min，点击Acquire，保存为X_Q1(X是目标分子简写），日期为当天日期；

3.3.6用鼠标选取稳定区域的TIC图，弹出质谱图，读取与目标分子相对分子质量MW±1的离子m/z值（正离子模式MW+1,负离子模式MW-1）；

3.3.7若强度低于e5，按4.7的特殊情况进行处理。

3.4 寻找子离子

3.4.1在Mass Method界面选择Scan Type：Product Ion(MS2)，如图4.2，在Product Of 框中输入4.3.6确定的母离子质荷比，其余参数可参考图4.2设置；

3.4.2勾选Edit Ramp，对CE进行优化，在Parameter 中选择Collision Energy：设置范围从5到130，step为5，点击OK，点击Acquire，保存为X_PI（X是目标分子简写），日期为当天日期；

3.4.3用鼠标选取稳定区域的TIC图，弹出一个质谱图，分别记录强度高的五个子离子质谱峰的质荷比。

图3.2

3.5其它结构相似的目标分子母离子和子离子确认

按4.2和4.3确认母离子和寻找子离子，完成后，分析子离子质谱图，找出共有的3个子离子的质荷比，若无完全一致的子离子，分别各找3个共有最多的子离子质荷比

3.6优化母离子扫描的化合物参数

3.6.1用1ml注射器吸取目标分子溶液混合物，赶出气泡，将其置于质谱的针泵放好；

3.6.2选择Syringe Pump Method,勾上use（

），选择注射器型号：直径4.61mm，先以大流速（如30μl/min）跑1min，点击Start Syringe，开针泵稳定后改为5μl/min的流速；

3.6.3切换到Mass Method，选择Scan Type：Precursor Ion（Prec），如图4.3，Precursor框中填入4.4确定的共有的一个子离子质荷比，设置扫描范围（Start:50,Stop:目标分子相对分子质量+50），其余参数参考4.3设置；

3.6.4优化质谱参数，点击Edit Ramp，选择优化CE，参数如图4.4设置，点击OK，Ramp Parameter左边的框会勾上勾，点击Acquire，保存为X_Prec_CE（X是目标分子简写），日期为当天日期；

3.6.5 CE优化图谱如图4.5所示，鼠标点击最高点，出现质谱图，确认多种目标分子的母离子出现，图4.5最高点CE为优化的CE值（准确到0.1），做好记录；

3.6.6在CE框中填入4.6.5优化好的CE，按4.6.4和4.6.5步骤优化DP；

图3.3

图3.4

图3.5

3.6.7优化结束后保存方法，点击File-Save as，保存方法为X_Y_Prec_final.dam(X为目标分子简写，Y为子离子的质荷比）；

3.6.8优化好其中一个子离子的所有母离子碎片化合物参数，按4.6.3至4.6.7优化4.5确认的其余共有子离子的母离子碎片化合物参数；

3.6.9所有优化结束后，关闭注射泵。

3.7 特殊情况处理

若以上操作不能找到目标分子的母离子，可采取以下方式：

3.7.1切换到阴离子模式进行采集；

3.7.2重新优化源气参数；

3.7.3使用新配置的目标分子溶液；

3.7.4更换成1ppm或更高浓度的溶液；

3.7.5向质谱相关负责人或应用工程师求助。

4.质量标准与评估

质量指标名称	质量指标	测量方法
仪器日常质控指标	Q1、Q3 175.113 >=1.2e6,Peak width:0.6-0.8 Q1、Q3 500.38 >=9e6,Peak width:0.6-0.8 Q1、Q3 906.673 >=1.4e7,Peak width:0.6-0.8	PPG
Q1 intensity	>1e5	Q1 Scan

5. 注意事项

5.1. 仪器使用时应注意离子源处的高压，防止触电。