类固醇类激素检测国内标准比较解读

hujiangtao

2024/10/08
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液质联用（LCMS）

类固醇激素检测国内标准比较解读

类固醇激素是生物体内产生的一类调节机体生理机能、促进机体新陈代谢的小分子亲脂类物质。由于其能够通过促进蛋白质沉积、降低脂肪比率，从而提高饲料转化率的功能，被一些不法商贩添加到畜禽养殖饲料中导致动物体内残留，人体长期摄入会严重危害身体健康。因此我国在《兽药管理条例实施细则》中明确规定不得添加激素类药物。目前该类物质的检测方法主要包括液相色谱-串联质谱法、气相色谱-质谱法等，现将国内相关主要检测标准总结如下：

序号	标准名称	检测原理	药物数量、种类
1	GB 31656.14-2022 食品安全国家标准水产品中27 种性激素残留量的测定液相色谱-串联质谱法	试样用乙酸-乙酸钠溶液溶解，乙酸乙酯-甲基叔丁基醚混合溶剂提取，浓缩后用C₁₈固相萃取柱净化，供液相色谱-串联质谱仪检测，内标法定量。	27种：己二烯雌酚、己烯雌酚、雌酮、己烷雌酚、雌二醇、雌三醇、炔雌醇、苯甲酸雌二醇、群勃龙、诺龙、雄烯二酮、勃地酮、睾酮、炔诺酮、美雄酮、甲基睾酮、康力龙、苯丙酸诺龙、丙酸睾酮、孕酮、21α-羟基孕酮、17α-羟基孕酮、甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮、左炔诺孕酮
2	GB 31658.9-2021 食品安全国家标准动物性食品及尿液中雌激素类药物多残留的测定液相色谱－串联质谱法	试样在乙酸铵溶液中经β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶酶解，加乙腈提取，过HLB-氨基串联SPE小柱，氮吹定容后供液相色谱-串联质谱法进行检测，内标法定量。	8种：雌三醇、雌酮、炔雌醇、17α-雌二醇、17β-雌二醇、己烯雌酚、己烷雌酚、己二烯雌酚
3	GB/T 21981-2008 动物源食品中激素多残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法	试样在乙酸-乙酸钠溶液中经β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶酶解，用甲醇提取，ENVI-Carb串联氨基固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱仪检测，内标法定量。	50种：去甲雄烯二酮、群波龙、勃地酮、氟甲睾酮、诺龙、雄烯二酮、美雄酮、睾酮、普拉雄酮、甲睾酮、异睾酮、美雄醇、表雄酮、康力龙、17β-羟基雄烷-3-酮、美睾酮、达那唑、美雄诺龙、21α-羟基孕酮、17α-羟基孕酮、甲基炔酮、甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮、乙酸氯地孕酮、孕酮、甲羟孕酮乙酸酯、曲安西龙、醛固酮、泼尼松、可的松、氢化可的松、泼尼松龙、氟米松、地塞米松、乙酸氟氢可的松、甲基泼尼松龙、倍氯米松、曲安奈德、氟轻松、氟米龙、布地奈德、丙酸氯倍他索、雌三醇、雌二醇、炔雌醇、雌酮、己烯雌酚、己烷雌酚、己二烯雌酚
4	农业部1031号公告-1-2008 动物源性食品中11种激素残留检测液相色谱-串联质谱法	试样溶于10%碳酸钠溶液中，与叔丁基甲醚均质，震荡提取，浓缩蒸干后用50%乙腈水溶液溶解残渣，冷冻离心脱脂净化，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。	11种：睾酮、甲基睾酮、黄体酮、群勃龙、勃地龙、诺龙、美雄酮、司坦唑醇、丙酸诺龙、丙酸睾酮、苯丙酸诺龙
5	农业部1068号公告-3-2008 饲料中10种蛋白同化激素的测定液相色谱-串联质谱法	饲料样品以甲醇溶液超声波提取，离心后经C₁₈固相萃取柱净化，用高效液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。	10种：大力补、甲基睾丸酮、丙酸睾酮、睾酮、诺龙、丙酸诺龙、勃地龙、群勃龙、脱氢异雄酮、黄体酮
6	农业部1063号公告-2-2008 动物尿液中10种同化激素的检测液相色谱-串联质谱法	试样在pH 7.0±0.1（盐酸或氢氧化钠溶液调节）条件下，37℃经β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶酶解，上清液用C₁₈固相萃取柱净化后氮吹，乙腈-水溶解后进行液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。	10种：甲基睾酮、大力补、睾酮、丙酸睾酮、去氢睾酮、诺龙、丙酸诺龙、群勃龙、康力龙、孕酮
7	GB/T 22260-2023 饲料中蛋白质同化激素的测定液相色谱-串联质谱法	饲料加乙腈提取，PSA吸附净化，液相色谱-串联质谱仪检测，内标法定量。	11种：睾酮、甲基睾丸酮、勃地龙、美雄酮、雄烯二酮、脱氢异雄酮、诺龙、丙酸诺龙、司坦唑醇、醋酸美伦孕酮、黄体酮
8	农业农村部公告第282号-1-2020 饲料中炔雌醇等8种雌激素类药物的测定液相色谱-串联质谱法	饲料试样加乙腈提取，氮吹近干后加入乙酸乙酯溶解残渣，加入5%碳酸钠溶液涡旋混合进行液液萃取，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。	8 种：雌三醇、雌酮、炔雌醇、17a-雌二二醇、17β-雌二醇、己烯雌酚、己烷雌酚、己二烯雌酚
9	SN/T 1980-2007 进出口动物源性食品中孕激素类药物残留量的检测方法高效液相色谱-质谱/质谱法	试样在乙酸铵缓冲溶液中经β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶酶解，乙腈提取，正己烷-二氯甲烷脱脂，C₁₈固相萃取柱净化后浓缩，高效液相色谱/串联质谱测定，内标法定量。	9种：17α-羟孕酮、烯丙孕素、诀诺孕酮、诀诺酮、美仑孕酮、甲地孕酮、孕酮、甲羟孕酮、氯地孕酮
10	GB 31658.7-2021 食品安全国家标准动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮残留量的测定气相色谱－质谱法	试料在乙酸钠溶液中经β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶酶解，乙酸乙酯提取，C₁₈固相萃取柱净化，加入甲苯、衍生化试剂（二流赤藓糖醇、N-甲基三甲基硅基三氟乙酰胺、三甲基碘硅烷，80℃衍生60 min，冷却后供气相色谱-质谱仪测定，外标法定量。	4种：17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇:、雌酮
11	SN/T 2677-2010 进出口动物源性食品中雄性激素类药物残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法	试料在乙酸铵溶液中经β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶酶解，乙腈提取，C₁₈-氨基串联固相萃取小柱净化，浓缩后用液相色谱-质谱/质谱测定，内标法定量。	7 种：去甲雄三烯醇酮、去氢睾酮、19-去甲睾酮、睾酮、脱氢表雄酮、雄烯二酮、表睾酮
12	SN/T 4744-2017 进出口食用动物性激素残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法	试料在乙酸钠缓冲溶液中经β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶酶解，甲醇溶液提取，石墨化炭黑-氨基串联固相萃取柱富集净化，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。	23种：群勃龙、勃地酮、雄烯二酮、诺龙、美雄酮、睾酮、甲基睾酮、康力龙，块诺酮，21α-羟孕酮、17α-羟孕酮、炔诺孕酮、甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮、孕酮、雌三醇、雌二醇、雌酮、己烯雌酚、己二烯雌酚、己烷雌酚

从以上标准可以看出，由于类固醇激素进入动物体内会与蛋白结合，因此要想从动物源基质准确检测目标组分含量，需要首先对试样进行酶解；而饲料中激素来源一般属于人为添加，呈游离状态，可以不用酶解直接提取。大部分雌激素适合负离子模式，而大部分孕激素、雄激素适合正离子模式，因此这些不同种类的组分同时检测时液质流动相选择很重要，要兼顾正负离子模式，因此一般在流动相无机部分选择加入乙酸铵。前处理提取试剂一般以甲醇、乙腈、叔丁基甲醚为主，净化时选择C₁₈、石墨化炭黑-氨基柱等SPE小柱，需要注意的是如果待测目标组分中含有极性较弱的化合物时，尽量不要选择正己烷除脂，否则可能造成目标物进入到正己烷中，导致回收率偏低。由于类固醇激素受基质干扰较大，且外标法绝对回收率偏低，有条件的尽可能选择同位素内标法校正基质效应和回收率。