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从小白开始学色谱之荧光检测器

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2024/10/08

液相色谱（LC）

“ 荧光检测器（Fluorescence Detector, 简称FLD）是一种在分析化学，尤其是高效液相色谱（HPLC）中广泛应用的高灵敏度检测技术。它基于物质的荧光特性，即某些化合物在特定波长的光激发下，能够发射出波长较长的荧光。以下是关于荧光检测器的详细说明。”

一、工作原理

荧光检测器利用光致化学发光原理，当样品中的荧光物质被如紫外光的激发光照射后，从基态跃迁到激发态，随后返回基态时释放出能量，即荧光。这种检测器特别适合于那些能产生荧光的化合物的痕量分析。

二、特点与优势

- 高灵敏度：荧光检测器的灵敏度远高于紫外-可见光检测器，可达到0.1 ng/mL的最小检测浓度，适用于痕量分析。
- 选择性：只有能产生荧光的化合物会被检测，提供了一定程度的分析选择性，减少了背景干扰。
- 线性范围：虽然线性范围不如紫外检测器宽，但对于痕量分析已足够。
- 受外界条件影响小：对温度、压力和流速的变化相对不敏感，保证了检测的稳定性。
- 梯度洗脱适应性：能够适应梯度洗脱条件，只要流动相不产生荧光。

三、维护与使用注意事项

- 溶剂选择：避免使用会抑制或吸收荧光的溶剂，并考虑溶剂极性和温度对荧光强度的影响。
- 样品浓度：防止荧光淬灭，样品溶液浓度应低于10^-6g/mL。- 流通池维护：流通池由纯石英制成，需注意背压不超过20bar，以防止损坏，并保持废液管畅通。
- 光源：通常使用氙灯作为激发光源，其波长范围广，覆盖200nm至900nm。

四、应用领域

荧光检测器广泛应用于生命科学、药物分析、环境监测和食品科学等领域，特别是在氨基酸、维生素、甾体化合物等具有天然荧光或经过衍生化后的痕量物质分析中。

五、与其他检测器的比较

尽管荧光检测器在灵敏度和选择性上表现出色，但其线性范围较窄，且不是所有化合物都具有荧光性，这限制了它的通用性。相比之下，紫外/可见光检测器虽然灵敏度较低，但适用范围更广，而电化学检测器和示差折光检测器则分别适用于电活性物质和非荧光性大分子的检测。

综上所述，荧光检测器是分析化学中一个不可或缺的工具，尤其在需要极高灵敏度和选择性分析的场合。正确的维护和使用方法能确保其长期稳定地发挥最佳性能。

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