仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
色谱
>
液相色谱(LC)
>
帖子详情
色谱中的两种超载-UV超载和质量超载
p3203140
2024/10/17
私聊
液相色谱(LC)
在实际分析中,经常碰到
UV
超载和质量超载,那么质量超载后,浓度和峰面积还成线性吗?
UV
超载,质量就一定超载吗?
体积超载
在
《
现代
液相色谱
技术导论
》
第三版
P
35
,
给出了体积超载和质量超载的定义:
“由于样品的进样体积或进样量太大而造成的分离度(或)保留时间的变化,分别称为体积超载或质量超载”,
分别对应下图
A
和
B
:
乍看这个定义,很懵,甚至读第三次的时候,任然懵,说的是进样体积,本质是
UV
超载,为什么说体积超载?如果溶液浓度很稀,进样高体积(且无溶剂效应和质量超载),真的会出现图
A
这个情况吗?
实际实践了一下
:配制某化合物
5ug/mL
,采用下表
100*4.6mm*3um
的色谱柱(临界体积为
62.8uL
),
依次
进样
30uL
,
50uL
,
70uL
,
80uL
,
90uL
,
100uL
,得到
如下重叠图,除了保留时间稍微有点飘,没发现
A
图所说的结果.
各种规格色谱柱的临界进样体积计算公式:
书中给出了
4
种不同规格型号色谱柱的临界体积(上表中标红色的),其他为自己
计算后加上,
为什么没给出
250*4.6mm 5um
色谱柱的?计算结果显示该规格型号色谱柱的临界体积较大,分别为
104.7uL
和
81.1uL
,常用分析仪器进样体积也就
1-100uL
,体积超载概率太低。。
书中“
2.6.1
条—体积超载 样品体积对分离效果的影响”说完,都没指出体积超载就是
UV
超载(那是不是呢?就按照
UV
超载去理解吧),只有在“
2.6.3.1
条”最后提到一句话
“样品的最大进样浓度或者最大进样量
W
max
应该尽早确定,这样就能避免因为样品超载引起的问题,包括检测器超载引起非线性的检查结果
”
但不能让人和体积超载联系起来。
个人理解:书中所说的体积超载只是用来表征检测器(常用
UV
)超载的指针,
UV
超载呈现给我们最直观的就是色谱峰,那以什么指标去衡量
UV
超载?只有计算体积比较直观了,这也可能是作者采用体积超载来描述
UV
超载的原因吧。如果不对也尽请谅解。
质量超载
理解较容易,也不会有什么难点,色谱柱的最大柱容量给出如下公式:
最大柱容量和柱子长度无关,和色谱柱内径的平方成正比。
回到前言的问题:质量超载后,浓度和峰面积还成线性吗?
案例
1
某化合物检测波长采用
220nm
,进样
10uL
,
0.1mg/mL
至
100mg/mL
范围内的线性方程如下:
结果显示,虽然质量超载严重,但浓度和峰面积仍然成线性,且截距百分百很小,说明
UV
无超载问题,为什么?紫外图显示,该化合物的最大吸收处于末端吸收,检测波长在
220nm
吸收平缓,且吸收不强,即使进样质量超载,化合物流经
UV
时,其紫外吸收尚未溢出,故仍然成线性。如果选择
200nm
作为检测波长,肯定不成线性;
案例
2
某化合物,检测波长
200nm
,供试品浓度为
10mg/mL
,进样
10uL
,结果如下:
结果显示,质量和
UV
均超载,浓度大于
3mg/mL
以后已经不成线性,
3mg/m
以下,看起来
R
2
较好,但是截距很大,响应因子一直呈降低趋势,可能是化合物响应太强,低浓度仍然处于
UV
超载,在加上操作误差综合导致
.
质量不超载,检测波长处如果紫外吸收很强,则仍然会导致
UV
超载,不成线性,质量超载和
UV
超载,不存在必然的关系,关键还需要看化合物结构和所选择的检测波长;选择没有紫外吸收或紫外吸收很弱的波长做检测波长,那
UV
超载就比较困难。
相关话题
1
【汇总贴】高效液相色谱基础篇知识汇总
2
高效液相色谱的泵有啥奥秘?看完这篇就够高效液相色谱的泵有啥奥秘?看完这篇就够了
近期热榜
迎国庆送壕礼!十月发帖抢大疆云台
【11月12日开播】第九届水质分析技术大会!
第6季 “仪器心得”有奖征文活动
LC-MS实验瓶颈的突破与优化
热门活动
宝藏核磁实验室的得力助手征文活动
【售后专场--招聘会】
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
[共享]:色谱技术在体内药物分析中的应用进展
2006/03/31
液相泵排气一直有连续不断的气泡排除.........泵处有毛病了?
悬赏帖
2016/12/16
【液相色谱之家】群里有没有老师遇到液相压力突然变小的情况,在相同流动相和比例条件下,压力与之前相比减少一半左右,这是什么问题,请老师们指教,谢谢
讨论
2017/08/02
【求助】两个黄酮峰分不开啊!
2008/12/12
氨基酸自动分析仪日立L-8900
求助
2017/06/12
【求助】岛津LC-20AT 检测物质时,其方法检测限如何确定? 给个具体说明吧
2010/08/25
关于谷氨酸和焦谷氨酸
已应助
2019/11/24
液相检测 试剂配制相关问题!请教大家!!
求助
2011/07/06
【汇总贴】高效液相色谱基础篇知识汇总
原创
2024/10/17
高效液相色谱的泵有啥奥秘?看完这篇就够高效液相色谱的泵有啥奥秘?看完这篇就够了
分享
2024/10/17
色谱中的两种超载-UV超载和质量超载
分享
2024/10/17
HPLC色谱柱污染后的再生方法
分享
2024/10/17
高效液相色谱方法开发篇|关于ICH Q14的开发要求小知识
分享
2024/10/17
高效液相色谱方法开发篇|关于方法建立的不同策略汇总小知识
分享
2024/10/17
安捷伦1260 infinity ii二代为什么泵在最下面
求助
2024/10/16
waters通讯故障
讨论
2024/10/16
对虚假报告零容忍
第十七届原创
2024/10/10
作为计量人员,你们听到过客户最“离谱”的要求有哪一些?说出来大家一起乐一乐
讨论
2024/10/14
云端相约|一触即动,精准掌控——全自动移液工作站功能焕新
分享
2024/10/10
【仪器心得】+第四代pH值全流程自动测试工作站前沿技术简介
第十七届原创
2024/10/10
想请问一下 TEAA流动相 想把pH从5.5左右调到7.0,应该用什么试剂呀
求助
2024/10/11
求助,氰戊菊酯气相ECD出三个峰并都呈现线性关系
求助
2024/10/14
内部培训时,培训人员需要什么资质?
讨论
2024/10/10
求助,我的岛津气相GC2010-Pro进样器显示03,报错,换了几根旧针都不行,不知道是哪里的问题,如果上机油上到哪里,谢谢大家!
求助
2024/10/12
阿苯达唑及代谢物,用液相色谱做不出来
求助
2024/10/17
铝钛合金金相组织
分享
2024/10/17
地下管线探测仪解密:如何应对管道腐蚀事故
分享
2024/10/17
实验室安全法规标准及本质安全探讨
第十七届原创
2024/10/17
【汇总贴】液质高分辨质谱(Q_TOF)的应用
分享
2024/10/17
HPLC色谱柱污染后的再生方法
分享
2024/10/17
认可准则变更后有些名词改变,这种情况实验室的体系文件还需要做修订调整吗?
讨论
2024/10/17
高效液相色谱方法开发篇|关于ICH Q14的开发要求小知识
分享
2024/10/17
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...