【求助】有人知道菜籽油中的总黄酮的测试方法吗?

好象是用比色法,在两种nm的吸光度差,很久没接触了.

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破布一It一属(microeos Linn)全世界约60种，分布于非洲、 印度、马来西亚等地。在我国有2种，为破布叶和海南破布叶。 破布叶(协ieroeos paniculata L.)又名布渣、包蔽木、泡卜 布、破布树、布包木、狗具木等，为灌木或小乔木，属锻树科 破布叶属植物，1二要分布于我国海南、广东、广西、云南等地。 破布叶的仆卜，用州青热解毒，消食积。主治感胃，消化不良， 腹胀，黄疽，蚁蚁咬伤，腹胀，黄疽，小儿盗汗，作茶饮去食 积等i’·2，。黄酮类化合物是植物中非常重要的一类次生代谢产 物，具有降脂、抗血栓、抗心律失常、抗氧化、降糖、消除体 内自由基、增强肌体免疫功能等多种生理活性。为充分开发利 用破布叶药用植物，本文利用分光光度法对破布叶的叶、茎和 果中的总黄酮含量进行了测定研究，为该药用植物的综合开发 和利用提供科学依据和参考。 1实验部分 1.1仪器与试剂 UV757CRT紫外可见一分光光度计(!几海精密仪器有限公 司);电子天平(_L海精科天平)‘):RE一52A型旋转蒸发器(l飞 海亚荣生化仪器厂):索氏提取器。芦丁对照.公.(质星分数为 99.2%，中国药品生物制品检定所):亚硝酸钠、氢氧化钠、 硝酸铝、甲醇、石油醚等试剂均为囚产分析纯:破布叶于2005 年10月采集于海南省，_二亚市落笔洞地区，经海南师范人学 生物系钟琼芯副教授鉴定为破布叶Microcos ptlnicu!”taL· 的叶、茎和果。 1 .2实验方法 1.2.1标准曲线绘制 参照文献;不们的方法，精确称取译燥至恒秉的芦丁对照品 ZOmg，用甲醇溶解并定容于100ml容鼠瓶‘l，，摇匀，得浓度为 0.Zmg/mL的标准溶液。精确吸取芦丁标准济液0.oml、1.oml、 2.omL、3.oml』、4.omL、5.omL，分置J立10ml容鼠瓶‘t，，各加 甲醉至smL，再加入质量分数为5%NaNO:溶液0.smL，摇匀， 广东化工 2006年第3期 gdch枷 .C侧11 第33卷总第155期 室温放置6min，再加质量分数为10%的Al(N03):，溶液0.smL， 摇匀，室温放置6min，再加质量分数为4%的Na0H溶液4.omL， 摇匀，室温放置IOmin，在50Onm波长下测定吸光度，同时以 试剂空白作参比。以吸光度A为纵坐标，芦丁浓度C(mg/mL) 为横坐标，绘制标准曲线。 1.2.2试样中黄酮类化合物的提取与测定 分别准确称取己粉碎的破布叶的叶、茎和果各l份，每份 2.09，置索氏提取器中，加入石油醚，加热回流至提取液无色， 放冷，弃去石油醚液。将药渣中石油醚挥干，继续用甲醇提至 无色，提取液移置10OmL容量瓶中，加甲醇至刻度，备用。为 使测定稳定，从10OmL提取液中精确吸取5.0~25.omL，置于 10OmL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得破布叶提取稀释液， 备用。 精确吸取破布叶各部位提取液稀释液1.OmL，分置于10mL 比色管中，各加甲醉至smL，余下部分按土二述1.2.1项操作得 样品供试液，在500nm波长下测定吸光度。同时，精确吸取破 布叶相应部位提取稀释液1.omL，置于IOmL比色管中，加甲醉 至smL，再加蒸馏水1 .omL和质量分数为4%的Na0H溶液4mL 作参比。按下式计算破布叶中的总黄酮质量分数。。 。=(10oCx犷xf/Iooom)xloo%(l) 式中:C为由回归方程计算出的破布叶中的总黄酮浓度 (mg/mL):V为样品供试液体积(mL):f为稀释倍数;m为破 布叶样品质量(g)。 2结果与讨论 2.1测t波长的选择 配制不同浓度的芦丁标准溶液，精确吸取2.OmL，按本文 1.2.1项所述方法进行操作，在UV757CRT紫外一可见分光光度 计上从450~6O0run范围进行波长扫描，同时以试剂空白作参 比，得芦丁标准溶液吸收扫描曲线(见图l)。选择最大吸收波 长500 nm为测量波长。 ;:{鳄 mg/mL) mg/mL) 64 O︸斑U 0 .04(mg/mL) 0200 460 480 500 520 540 560 580 600 人/nm 图1芦丁不同浓度标样显色后 2.2工作曲线与回归方程 按1.2.1节标准曲线绘制项下的方法测定，绘制的标准曲 线见图2。试验表明，芦丁浓度在0.00~0.10mg/mL范围内线 性关系良好。得回归方程:A二11.4486C一0.00543，相关系 数r二0 .9996。 2.3破布叶各部位总黄酮含量的测定结果 从测定结果可知(见表l)，破布叶叶中的总黄酮平均质量 分数为16.94%，RSD二1.01%(n二6):茎中为5.15%，RSD =1.94%(n=6):果中为1.52%，RSD二2.76%(n二6); 其中叶中的总黄酮含量最高。 2.4方法学考察 2.4.1稳定性试验 精确吸取芦丁标准溶液和破布叶各部位提取稀释液各 1.OmL，分置于IOmL比色管中，各加甲醇至smL:余下部分分 别按1.2.1项和1.2.2项的方法进行操作。试验表明，在室温 表1破布叶各部位中总黄酮含t的测定结果 部位n(测量次数) 平均质量分数/%RSD/% 叶A(吸光度) 0.309 0.309 0.301 0.3040，306 0 .305 16.94 1 .01 茎A(吸光度) 0.234 0.235 0.227 0.2230，231 0 .230 5 .15 1 .94 果A(吸光度) 0.165 0.176 0.172 0.166 0.164 0 .1 70 1 .52 2.76 表2加标回收率试验 部位 n(测量次数) 试样量/“g 加标量/pg 测得量/“g 试样量/“g 加标量/“g 测得量/“g 试样量/pg 加标量/“g 测得量/pg 平均回收率/% RSD浅 271.0 271.0 271.0 200.0 2000 200.0 200.0 2000 102.:l 1 82 2060 476.0 206.0 476 206 471 206 474.0 206.0 100.0 100 307 100.0 100.0 100 305 98.4 1 .95 n‘，‘ n︸产a 件八11 3050 1520 100.0 303 152 100.0 1000 2 .55 ，﹄八曰 -净0 1.lt‘1 244，0 250.0 244.0 2470 毛28℃的环境中，显色时间在10~60min范围内，吸光度没有 变化。因此，在本试验选择的测定时间内，黄酮类化合物与铝 离子生成的络合物显色是稳定的。 100， 0 .80 0 .60 0 .40 0 .20 0 .00书二一一一，一一--甲一一一一甲 0 .00 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 C/(mg·mL一’) 图2标准曲线 2.4.2加标回收率和精密度试验 向已知含量的样品溶液中添加一定量的芦丁标准品，按 1.2.2项的方法测定总黄酮含量，计算回收率和精密度，结果 见表2。得破布叶的加标平均回收率为102.3%，RSD=l .82%(n 二5);茎的加标回收率为98.4%，RSD=l .95%(n二5):果的加标回 收率为94.0%，RSD二2.55%(n二5)。 2.5所用试剂浓度的选择 根据正交表Ll。(43)进行三因素四水平的正交试验，对显 色剂NaN氏一Al(N0=t)3一NaOH体系中的各物质的浓度进行最优 化选择。试验结果证明:亚硝酸钠质量分数为5%、硝酸铝质量 分数为10%和氢氧化钠质量分数为4%，显色溶液的吸光度有 最大值，而且测定液澄明。 2.6样品空白的选择 在测量破布叶总黄酮含量时发现，在不加入硝酸铝和亚硝 酸钠的情况下，单独加入氢氧化钠溶液后比没有加入时的测量 值略高。为了抵消样品供试液中某些化学成分可能与碱作用生 成有色物质而引起的误差!5一川，故本法选择在加入样品提取液 1.omL后，再加甲醇4.omL，蒸馏水1.omL和4.omL质量分数 为4%的Na0H溶液作为样品空白。 3结论 以NaN压一AINO。一Na0H为显色体系，采用分光光度法测定 破布时一中的总黄酮含量，操作简便，线性关系良好，测定范围 宽，其准确度及精密度均能满足测定要求。分光光度法测定破布叶中总黄酮@毕和平$海南师范大学化学系!海南 海口 571158
@韩长日$海南师范大学化学系!海南 海口 571158
@王芳$海南师范大学化学系!海南 海口 571158
@乔丽艳$海南师范大学生物系!海南 海口 571158
@陈光英$海南师范大学化学系!海南 海口 571158利用分光光度法测定了破布叶的叶、茎、果中的总黄酮含量,结果表明,破布叶叶、茎 、果中的总黄酮质量分数分别为16．94％、5．15％和1．52％。回归方程为A=11． 4486C-0．00543,r=0．9996。叶、茎、果的平均加标回收率分别为102． 3％、97．6％和92．6％,RSD依次为1．01％、1．94％和2．76％(n=5) 。本法操作简便、可行、重现性好。破布叶;;总黄酮;;分光光度法;;含量测定<1>江苏新医学院．中药大辞典(下册)．上海:上海科学技术出版社, 2003．1824—1825．
<2>陈焕镛．海南植物志(第2卷)．北京:科学出版社,1977．58-59．
<3>毕和平,韩长日,舒火明,等．狭瓣鹰爪总黄酮含量的测定．广东 化工,2005,32(12):30-31．
<4>毕和平,韩长日,谢新民,等．三叉苦中总黄酮的测定．中草药, 2005


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可见紫外分光光度法测定总黄酮的含量，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，测定波长为200～600nm中某一波长，采用标准曲线法或对照品法测定，同时选取一对照品即可。