茜草中大叶茜草素和羟基茜草素检测方案(液相色谱柱)

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引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163中国药典2010版对应高效液相色谱图集 茜草分析 茜草的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品为茜草科植物茜草Rubia cordifolia L. 的干燥根和根茎。春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。 【功能与主治】凉血，祛瘀，止血，通经。用于吐血，衄血，崩漏，外伤出血，瘀阻经闭，关节痹痛，跌扑肿痛。 【含量测定】 色谱条件与系统适用性试验：色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0.2%磷酸溶液(25：50：25)为流动相；检测波长为250 nm。理论板数按大叶茜草素、羟基茜草素峰计算均应不低于4000。 对照品溶液的制备：取大叶茜草素对照品、羟基茜草素对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1mL含大叶茜草素0.1mg、含羟基茜草素40ug的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过二号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100mL， 密塞，称定重量，放置过夜，超声处理(功率250W，频率40 kHz)30分钟， 放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50mL，蒸干，残渣加甲醇25%盐酸(4：1)混合溶液20mL溶解，置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，加入三乙胺3 mL，混匀，转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液10pL与供试品溶液20uL， 注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含大叶茜草素(C，，Hj04)不得少于0.40%，羟基茜草素(CH，O，)不得少于0.10%。 茜草 样品来源：本品为茜草科植物茜草Rubia cordifolia L. 的干燥根和根茎。春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。 产地：河南。 对照品：大叶茜草素(由北京大学药学院提供，含量：≥99%) 羟基茜草素(由北京大学药学院提供，含量：：≥99%)。 对照品溶液的制备：取大叶茜草素对照品、羟基茜草素对照品品量，精密密定，加甲醇醇别制成每1mL含大叶茜草素0.1 mg、含羟基茜草素80 ug的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过二号筛)0.5011g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 mL， 密塞，称定重量，放置过夜，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50 mL， 蒸干，残渣加甲醇25%盐酸(4：1)混合溶液20mL溶解，置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，加入三乙胺3 mL， 混匀， 转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 色谱柱： Shim-pack XR-ODS Ⅱ(3.0 mm ×75 mm， 2.2 um) 仪器配置： 流动相：以甲醇为流动相A，0.2%磷酸溶液为流动相B，按下表中的条件进行梯度洗脱： UFLC-20ADXR高压泵 SPD-M20A二极管列列紫外可见光半微量检测器 柱温：30℃ CTO-20AC 柱温箱 检测波长：250nm (捕获频率12.5 Hz) CBM-20A系统控制器 流速：1.1 mL/min SIL-20AC 自动进样器 进样量：4pL 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163 时间(分钟) 流动相 A(%) 流动相 B(%) 0~0.1 60 40 0.1~5.0 60-90 40-10 5.0~6.0 90 10 6.0~7.0 90→60 10→40 7.0~9.0 60 40 对照品 实际样品 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 羟基茜草素 3.874 594777 158919 26873 1.28 大叶茜草素 6.063 1963500 622492 87538 1.16 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163 羟基茜草素标准曲线 重复性数据如下： 羟基茜草素 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 3.874 594777 3.909 196832 2 3.885 597389 3.925 195845 3 3.865 596094 3.927 196663 Average 3.865 596087 3.920 196447 RSD% 0.26 0.22 0.25 0.27 浓度 mg/mL 大叶茜草素标准曲线 大叶茜草素 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 6.063 19635 6.073 354049 2 6.065 19693 6.091 354631 3 6.056 19662 6.095 355860 Average 6.061 19663 6.086 354847 RSD% 0.08 0.15 0.19 0.26 色谱柱：Shim-pack XR-ODS II (3.0 mm x 75 mm, 2.2um)流动相：以甲醇为流动相A, 0.2%磷酸溶液为流动相B，按下表中的条件进行梯度洗脱：柱温：30℃检测波长：250 nm 流速：1.1 mL/min进样量：4ul