饲料中烟酸和叶酸检测方案(液相色谱仪)

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饲料中烟酸和叶酸的测定 1.方法提要 目前饲料中都添加有多种维生素，以保证动物健康生长。如果动物完全缺少一种或数种维生素，或者是摄入量不足，某些代谢过程就将受到损害，从而导致生长受阻或者疾病。烟酸又称尼克酸是参与体内酶系统的一种维生素，对机体的碳水化合物、脂肪和蛋白质代射起主要作用，当肌体缺乏烟酸时则可引起新陈代谢的障碍；叶酸是一种广泛存在于绿色蔬菜中的B族维生素，缺乏叶酸会使得雏鸡生长不良，羽毛不正常，贫血和骨短粗症等。本实验参照 GB/T17813-1999《复合预混料中烟酸、叶酸定测定》，对4%蛋鸡产蛋期复合预混料进行测定。 2.试剂及标准溶液配制 2.1试剂 甲醇：色谱纯 冰乙酸：分析纯 三乙胺：分析纯 0.005mol/L 己烷磺酸钠溶液0.1mol/L碳酸钠溶液 提取液：在已装入500mL去离子水的1000mL容量瓶中，加入10mL冰乙酸， 1.3mL三乙胺，去离子水定容至刻度摇匀(PH=3.2)。取850mL 上述溶液与150mL甲醇混合，超声脱气备用。 流动相：在已装入500mL 去离子水的 1000mL容量瓶中，加入10mL冰乙酸，1.3mL三乙胺， 20mL0.005mol/L己烷磺酸钠溶液，去离子水定容至刻度摇匀，调PH值至3.2，过 0.45pm滤膜。取该溶液 750mL与250mL甲醇混合，超声脱气备用。 烟酸和叶酸标准品 东西分析 2.2标准溶液配制 标准溶液的浓度为1、2、5、10、15、20pg/mL。 3.仪器及工作条件 3.1仪器 3.1.1 LC5510 高效液相色谱仪(北京东西分析仪器有限公司)。 3.1.2 DM-100在线脱气机(北京东西分析仪器有限公司)。 3.1.3超声波水浴 3.2色谱条件 色谱普： C18柱，250 mm x4.6 mm，5 um。 流动相：甲醇+己烷磺酸钠+冰乙酸+三乙胺。 流速：1.0mL/min。 检测波长：275nm. 柱温：30℃。 进样量：20pL. 4.分析步骤及分析结果 4.1试样处理 称取饲料样品2g左右(精确至0.0001g)于50mL棕色容量瓶中，加入5mL0.1mol/L碳酸钠溶液，浸湿样品，加入70mL的提取液，混匀，超声提取 20min，冷却至室室，用提取液定容至刻度，充分摇匀，过滤待测。 4.2测定 4.2.1标准曲线的绘制 将标准系列工作液依次按上述色谱条件上机测定，记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 EWAI [浓度(g/ml)] 回归方程：Y=4226.22 X-243.29 相关系数：0.99973 曲线点数：6 图1烟酸标准曲线 [峰面积(pV*S)] 回归方程：Y =30604.18 X-388.79 相关系数：0.99997 曲线点数：6 图2叶酸标准曲线 4.2.2样品的测定 将样品溶液按上述色谱条件上机测定，记录色谱峰面积，计算含量。 EWAI 图310pg/mL 烟酸、叶酸标样谱图 0.086· 时间(min) 图4样品谱图 -- -- 目前饲料中都添加有多种维生素，以保证动物健康生长。如果动物完全缺少一种或数种维生素, 或者是摄入量不足, 某些代谢过程就将受到损害, 从而导致生长受阻或者疾病。烟酸又称尼克酸是参与体内酶系统的一种维生素，对机体的碳水化合物、脂肪和蛋白质代谢起主要作用，当肌体缺乏烟酸时则可引起新陈代谢的障碍；叶酸是一种广泛存在于绿色蔬菜中的B族维生素，缺乏叶酸会使得雏鸡生长不良，羽毛不正常，贫血和骨短粗症等。本实验参照GB/T17813-1999《复合预混料中烟酸、叶酸的测定》，对4％蛋鸡产蛋期复合预混料进行测定。